预期用途
本试剂盒用于定性检测人结膜拭子、咽拭子、粪便或其它临床样本中的柯萨奇病毒A24型变种（CVA24v）RNA。适用于：
急性出血性结膜炎（AHC）病原体筛查
疫情暴发时的快速病原鉴定
流行病学调查
注：结果需结合临床表现及其他诊断指标综合判断，不可作为唯一诊断依据。
产品名称 | 柯萨奇病毒A24型变种染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Coxsackievirus A24 Variant Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4447 |
检测原理
RNA提取：样本中病毒RNA通过裂解液释放并纯化。
逆转录（RT）：提取的RNA逆转录为cDNA。
荧光定量PCR（qPCR）：
采用特异性引物靶向CVA24v保守区域（如VP1基因）。
DNA染料法（如SYBR Green/Evagreen）：与双链DNA结合后发射荧光信号，实时监测扩增进程。
通过Ct值（循环阈值）判定病毒载量。
主要组成成分
| 组分 | 规格（96测试） | 保存条件 |
| CVA24v RT-PCR预混液 | 1.2 mL × 1管 | -20℃ |
| 逆转录酶 | 40 μL × 1管 | -20℃ |
| RNase-Free水 | 1 mL × 1管 | 室温 |
| CVA24v阳性对照 | 200 μL × 1管（假病毒）| -70℃ |
| 阴性对照 | 1 mL × 1管（生理盐水）| 4℃ |
储存及有效期
储存条件：-20℃避光保存（避免反复冻融）
有效期：12个月
样本要求
| 样本类型 | 采集/处理要求 |
| 结膜/咽拭子 | 置于病毒保存液中，2-8℃保存≤72小时；长期储存需-70℃冻存。 |
| 粪便 | 取1-2g悬浮于PBS中，离心取上清液。 |
| 运输条件 | 冰袋（2-8℃）或干冰（-70℃）运输，符合UN3373生物安全要求。 |
检测流程
1. RNA提取
推荐使用商业化RNA提取试剂盒（如QIAamp Viral RNA Kit）。
2. RT-PCR反应体系配制（以20μL体系为例）
| 组分 | 体积 |
| RT-PCR预混液 | 10 μL |
| 逆转录酶 | 0.5 μL |
| RNA模板 | 5 μL |
| RNase-Free水 | 补足至20 μL|
3. 扩增程序（需在荧光定量PCR仪上运行）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |
| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 否 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |
| PCR扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 | 是 |
| | 60℃ | 30 sec | | 是 |
| 熔解曲线分析 | 65℃→95℃ | 0.5℃/sec | 1 | 是 |
结果判读
阳性：
Ct值 ≤ 38.0，且熔解曲线峰值温度与阳性对照一致（如82.5±1℃）。
阴性：
Ct值 = 40 或无扩增曲线。
无效：
阳性对照Ct值＞38 或阴性对照出现扩增 → 实验需重做。
性能参数
灵敏度：检出限（LOD）≤ 50 copies/mL
特异性：
不与其他常见肠道病毒（如EV70、CA16、EV71）交叉反应；
与腺病毒、流感病毒无交叉。
符合率：与Sanger测序相比，阳性/阴性符合率均 ≥ 98%。
注意事项
本试剂盒仅限专业人员在生物安全二级（BSL-2）实验室使用。
所有样本需视为潜在传染性物质，操作时穿戴防护装备。
避免试剂反复冻融（建议分装保存）。
熔解曲线分析是鉴别非特异性扩增的关键步骤。
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关键字： 柯萨奇病毒A24型变种;染料法荧光定量;PCR试剂盒;