副鸡嗜血杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 副鸡嗜血杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Haemophilus paragallinarum Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4600 |
产品特点
高特异性：针对副鸡嗜血杆菌保守序列（如ompD基因）设计引物，无交叉反应。
高灵敏度：检测下限可达几百拷贝/反应。
便捷性：即开即用，用户仅需提供DNA模板。
防污染设计：一管式闭管检测，避免扩增产物污染。
稳定性：-20℃保存，有效期1年。
试剂盒组成
| 成分 | 规格/包装 | 备注 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管） | 含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺等 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL（黄盖） | 用于标准品稀释 |
| 特异性引物混合物 | 100μL（白盖） | 靶向保守基因 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL（红盖） | 需梯度稀释 |
| 阴性对照 | 50μL | 无菌去离子水 |
| 使用手册 | 1份 | 含操作步骤及数据分析方法 |
运输与保存
运输条件：低温运输（冰袋或干冰）。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
实验步骤
1. 样本处理
采集禽类咽喉拭子或组织样本，提取DNA（需自备提取试剂）。
2. 阳性对照稀释（以10²~10⁷拷贝/μL为例）
按10倍梯度稀释阳性对照，独立操作避免污染。
3. PCR反应体系配置
在冰浴中混合以下成分：
2×qPCR MagicMix：10μL
引物混合物：2μL
模板DNA：2μL
ROX校正染料（依机型需求）：0.4μL
ddH₂O：补至20μL
4. 荧光定量PCR程序
| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃, 3min | 1 |
| 扩增 | 95℃, 15s → 60℃, 30s | 40 |
| 熔解曲线分析 | 95℃→60℃→95℃ | 1 |
注意事项
实验分区操作，避免气溶胶污染。
阳性对照需单独稀释，严禁直接使用高浓度标准品。
熔解曲线应呈现单一峰值，否则需排查非特异性扩增。
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