本产品仅供科研
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产品名称：猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5个数量级。
6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。
包装规格及成分（具体信息详见说明书）：
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 50μL |
试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50T |
试剂五 | PCR阳性对照(107拷贝/μL) | 50μL |
猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量PCR试剂盒操作过程：
一、稀释标准曲线样品（以 10E1-10E6 拷贝/μL 这6 个10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同。
3. 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品待提取，最好设置 N+2 个提取，多出的是PC（样品制备阳性对照）和 NC（样品制备阴性对照）。可以取阳性对照的1000倍稀释液10μL 再加上一定量的水，使总体积与待提取样品的规定体积一致，以此作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
如果进行定量分析，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做定性分析，则6个标准曲线样品只选一个做（可以选4号，其余样品不变）。以下只介绍定量分析的反应设置。
四、数据处理
1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log 值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的 log 值，再推算出其浓度。
2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲
线，Ct 值应该小于或等于 39。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于40 则为阴性，如果小于或等于 39 则为阳性。如果在 39-40 之间，
则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
| 成分 | 样品管N+2个 | RT-PCR阴性对照管 | 标准曲线样品管
（2-7 管） |
| 探针法qPCR缓冲液 | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 探针法 qPCR 酶混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| qRT-PCR探针 | 各 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
探针qRT-PCR
引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 RNA 模板 | 各 5 μL | -- | -- |
| 超纯水 | -- | 5 μL | -- |
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号） | -- | -- | 各5 μL（2号样到2号管，3号样到3 号管…） |
盖上盖子后上机，按下面参数进行 qRT-PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| qRT-PCR 反应（40 个循环） | 94℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号）
|
保存条件：-20℃
保质期：12个月
猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量PCR试剂盒检测方法的局限性
A.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
B.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
C.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
D.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
E.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
F.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量PCR试剂盒注意事项
1操作严格按照说明书进行；
2试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3反应液应避光保存；
4反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器
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上海雅吉生物科技的核心业务主要围绕生命科学研究所需的各类试剂、细胞、抗体及技术服务展开，具体可归纳为以下几个方面：
细胞产品与技术平台：
细胞产品：提供包括正常细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞在内的多种细胞系。同时，公司也是美国ScienCell等品牌的原代细胞产品的代理商。
稳转细胞株构建服务：公司具备丰富的蛋白表达研究经验，能够为客户提供从基因序列到稳定细胞株交付的一站式定制服务，应用于基因功能研究、药物筛选和重组蛋白生产等领域。
科研试剂：这是公司的基础和优势业务。产品线全面覆盖了分子生物学、免疫学、细胞生物学和微生物学等多个学科。
ELISA试剂盒：提供人、大鼠、小鼠、犬、鱼、鸡、牛等多种物种以及植物的ELISA检测试剂盒，在国内众多重点实验室中广泛使用并被科研文献引用。生化试剂、抗体与血清：提供包括一抗、二抗、单克隆/多克隆抗体在内的多种抗体产品，以及胎牛血清等细胞培养用血清。
蛋白研究相关试剂盒：提供超过300种针对不同样本来源（动物、植物、微生物）和不同细胞器（如线粒体、外泌体）的蛋白提取及检测试剂盒。