本试剂盒采用竞争性ELISA检测原理，利用抗原抗体竞争性结合反应定量检测大鼠VD3。酶标板预先包被VD3固相抗原，待测样本中的VD3与固相抗原竞争结合特异性抗体，经孵育、洗涤后，加入酶标记物催化底物显色。根据显色深浅与VD3含量的负相关关系，结合梯度标准品绘制的标准曲线，可精准测定大鼠样本中维生素D3的浓度。
基本参数：
产品名称：大鼠维生素D3(VD3)ELISA试剂盒
英文名称：VD3 ELISA Kit
货号：Y-E1470
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤0.8ng/mL
检测范围：1.5ng/mL - 90ng/mL
反应时间：全程115分钟，样本孵育65分钟，酶孵育30分钟，显色20分钟
保存条件：2-8℃密封避光保存，禁止高低温交替存放
有效期：未开封10个月，开封后试剂1个月内用完
特异性：高特异性识别大鼠活性VD3，与VD2、维生素E、维生素K无交叉反应
重复性：板内CV≤4%，板间CV≤6%
注意事项：高脂样本需预处理，脂质会吸附VD3导致结果偏低；温育需封闭酶标板，防止孔内液体蒸发。
关键注意事项：
本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。
终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。
终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。
实验步骤如下：
板条室温放置 32min，配制 VD3 标准品 6 个梯度浓度，样本离心稀释后上样，空白孔加稀释液，每孔 50μL。
每孔加入酶标记结合液 50μL，封板密封，37℃孵育 68min。
洗板 5 轮，每轮加满洗涤液静置 38s，彻底弃除游离杂质。
显色 A、B 液各 50μL 依次加入，混匀避光显色 19min。
加入终止液 50μL 终止显色。
酶标仪 450nm 检测吸光度并记录。
拟合标准曲线，计算稀释后浓度，换算原始样本 VD3 浓度。
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