宜兰农杆菌

商品属性：

产品描述：

宜兰农杆菌是农杆菌属的细菌，为革兰氏阴性杆菌。它可能存在于土壤、植物根系等环境中，部分菌株可携带Ti质粒，在植物基因工程中用作遗传转化载体，将目的基因导入植物细胞，培育转基因植物。该菌在植物病理学和生物技术研究中具有重要意义。
培养基  蛋白胨：10.0，牛肉浸粉：8.0，酵母粉：4.0，葡萄糖：20.0，硫酸镁：0.2，乙酸钠：5.0，柠檬酸氢二铵：2.0，磷酸氢二钾：2.0，硫酸锰：0.04，吐温80：1.0，琼脂：14.0，pH：5.7±0.2(25℃)

生长条件  30℃；24-48h；好氧；

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落直径为1-2mm，圆形，边缘不规则，不透明，正面灰白色，形态扁平，表面粗糙，质地干燥，G＋（蓝紫色），杆菌，纯度：纯

模式菌株  yes

操作步骤  ①准备上述平板 1-2 块；②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入平板中 200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

共享方式  公益性共享

菌种标准操作步骤:

一、准备工作

穿实验服、戴手套、口罩，在超净工作台内操作。

灭菌：培养基、枪头、离心管、接种环 / 针、生理盐水。

工作台紫外照射20–30 min，通风后开始。

二、菌种活化

取冻存菌种 / 安瓿菌种，室温 / 冰上缓慢解冻。

接种环火焰灭菌，冷却后蘸取少量菌液。

在固体培养基（如 LB、营养琼脂）上划线分离。

倒置培养：

细菌：37℃，12–24 h

真菌：28℃，48–72 h

三、挑单克隆扩大培养

挑取形态一致、边缘整齐的单菌落。

接种到液体培养基或新鲜斜面。

摇床 / 静置培养至对数生长期（OD 合适、浑浊）。

四、菌种传代

取少量菌液 / 菌落，接种到新培养基。

控制传代次数，避免多次传代导致性状退化。

每次传代做好记录：日期、代数、操作人、生长情况。

实验后处理:

菌种保存

将实验后的菌种进行冻存（如-80°C甘油保存或液氮保存）。

记录保存信息，便于后续使用。

废弃物处理

将实验废弃物（如培养基、菌液）进行高温灭菌处理。

按照实验室规定分类处理废弃物，避免环境污染。

实验总结

撰写实验报告，总结实验过程、结果及结论。

分析实验中的问题与改进措施。

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