蓝舌病病毒探针法qRT-PCR试剂盒(不含内参)
产品及特点
蓝舌病病毒(Bluetongue Virus，BTV)是一种RNA病毒，其病毒基因组由10个分子质量大小不一的双股RNA片段组成。它会引起蓝舌病，是反刍动物的一种严重传染病。以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征，病羊乳房和蹄部也常出现病变，且常因蹄真皮层遭受侵害而发生跛行，该病毒主要侵害绵羊，对养羊业造成严重损害，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品就是以探针法qRT-PCR技术为基础开发的专门检测蓝舌病病毒RNA的试剂盒，它有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据蓝舌病病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
6. 本产品足够50次20μL体系的探针法qRT-PCR反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分
成分 | 规格 | 包装 |
探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 0.5mL蓝盖管 |
探针法qRT-PCR酶混合液 | 50μL | 0.5mL红盖管 |
荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL | 1.5mL绿盖管 |
蓝舌病病毒qRT-PCR引物-探针混合液 | 150μL | 0.5mL棕色管 |
蓝舌病病毒qRT-PCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL) | 50μL | 0.5mL黄盖管 |
使用手册 | 1份 | 无 |
本产品采用五孔盒包装 |
稀释标准曲线样品
（以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品RNA的制备
7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
数据处理
1. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
2. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
自备试剂
样品RNA。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年。
关键字： qRT-PCR试剂盒 ; 探针法试剂盒 ; 蓝舌病病毒探针法 ;
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