大鼠迟现抗原(VLA)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔预先固定抗大鼠VLA特异性捕获抗体，加入梯度标准品和待测大鼠样本，样本中的VLA抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除非特异性结合杂质，加入HRP标记的VLA检测抗体形成稳定的免疫夹心复合物，经底物显色、终止反应后，检测吸光度数值，依据标准曲线精准定量VLA的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠迟现抗原(VLA)ELISA试剂盒

英文名称：VLA ELISA Kit
货号：Y-E1605

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度0.15ng/mL，可精准检测大鼠淋巴细胞表面微量VLA抗原。

检测范围：0.5ng/mL - 15ng/mL，适配大鼠外周血、脾脏、胸腺组织样本检测。

反应时间：总时长115分钟，抗原孵育45min、二抗孵育35min、显色30min、终止读数5min。

保存条件：2 - 8℃避光冷藏，抗体试剂禁止冷冻，微孔板开封后密封防潮。

有效期：未开封有效期6个月，开封后试剂1个月内使用完毕。

显色系统：优化TMB显色系统，抗原抗体结合显色特异性强，非特异性背景极低。

检测波长：450nm检测波长，搭配630nm参比波长消除系统误差。

标准曲线绘制：七梯度标准品浓度，四参数Logistic拟合，R²≥0.993。

特异性：特异性识别大鼠VLA抗原，与白细胞其他表面抗原无交叉反应。

重复性：板内CV≤4.2%，板间CV≤6.2%，满足免疫学检测重复性标准。

注意事项：细胞样本需充分裂解，去除细胞碎片；洗板步骤严格按照次数操作，避免残留未结合抗体；显色时间精准把控，避免过显色或显色不足。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

VLA 标准品复溶配制浓度梯度，试剂盒室温平衡 30min，排布酶标板三组微孔；

每微孔加入 50μL 梯度标准品或大鼠淋巴细胞上清，空白孔填充稀释缓冲液；

全部微孔加入 100μL 辣根酶标记抗 VLA 抗体，封板膜密封；

37℃避光孵育 64min，一步免疫结合反应；

洗涤液浸泡微孔 40s，彻底拍干，连续洗涤 6 次；

避光添加显色底物混合液 100μL，37℃避光显色 16min；

终止液混匀微孔液体，450nm 测吸光度，拟合标准曲线换算 VLA 浓度。
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