竞争抑制 ELISA 检测原理,微孔板包被人工合成 AcSDKP 抗原,样本中内源 AcSDKP 与板上固定抗原竞争结合体系内酶标记特异性抗 AcSDKP 抗体,洗涤去除游离组分后催化底物显色,样本 AcSDKP 浓度越高则结合酶标抗体越少、显色越浅,依据标准品吸光值曲线反向定量样本中 AcSDKP 浓度。
产品参数:
产品名称 | 大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E1161 |
英文名称 | AcSDKP ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:最低检测灵敏度≤1.5pg/mL
检测范围:3pg/mL - 1000pg/mL
反应时间:总反应时长150分钟(样本温育60分钟+洗板+二抗温育30分钟+显色30分钟+终止读数)
保存条件:未开封试剂盒2-8℃避光冷藏,浓缩洗涤液常温保存,开封后试剂密封避光2-8℃存放
有效期:原装未拆封试剂盒12个月
显色系统:TMB单组分显色液,HRP催化显色体系
检测波长:450nm(主检测波长)
标准曲线绘制:梯度标准品稀释后检测OD值,以浓度-OD值拟合四参数曲线,线性回归计算样本浓度
特异性:特异性结合大鼠AcSDKP多肽,与大鼠同源短肽、血清无关蛋白无交叉反应
重复性:板内CV≤7%,板间CV≤9%
注意事项:样本需新鲜采集、低温离心分离,避免反复冻融;温育过程需密封避光,防止液体蒸发、试剂污染;标准品需现配现用,稀释后不可留存复用。
储存与有效期:
未开封整套试剂盒:2~8℃避光冷藏,禁止冷冻;有效期 12 个月。
开封后保存
剩余酶标板条:自封袋密封,内置干燥剂 2~8℃避光;1 个月内用完。
HRP 酶结合物、TMB 底物:避光 2~8℃,避免光照失效。
浓缩洗涤液:2~30℃常温保存,结晶温水溶解不影响效果。
复溶后标准品:分装 - 20℃冻存,避免反复冻融,1 个月内使用。
过期试剂禁止使用。
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实验操作流程:
试剂平衡:所有试剂盒试剂室温复温 30min,浓缩洗涤液 1:20 稀释;标准品稀释液、样本稀释液提前分装,避免交叉污染。
标准品稀释:冻干 AcSDKP 标准品溶解后做连续倍比稀释,配置 6 个有效浓度梯度,单独预留空白孔无抗原添加。
孔板加样:标准孔加 50μL 不同浓度标准品,样本孔添加 50μL 稀释后待测样本,空白孔补 50μL 纯稀释液,每个组别设置 2 组复孔减少误差。
酶标抗体共孵育:每孔添加 50μL HRP 标记抗大鼠 AcSDKP 抗体,封膜固定,37℃避光孵育 55min,孵育期间禁止挪动酶标板。
洗板步骤:弃去孔内反应液,加满洗涤液静置 30s,倒扣于吸水纸拍干,循环洗板 5 次,孔内无肉眼可见残留气泡液体。
避光显色:各孔加入等量 A、B 底物各 50μL,避光 37℃反应 12min,显色程度随 AcSDKP 浓度升高加深,梯度区分明显即可停止。
终止读数计算:加入 50μL 终止液终止酶促反应,混匀后 5min 内 450nm 测吸光度,绘制标准曲线,计算样本内 AcSDKP 浓度。
关键字: 大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰;AcSDKP;ELISA试剂盒;
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