双抗体夹心酶联免疫吸附试验,微孔板固定抗大鼠 IDS 捕获抗体,样本中 IDS 酶蛋白结合固相抗体,洗去未结合杂质后加入酶标记抗 IDS 检测抗体形成夹心复合物,TMB 显色测定吸光度,通过标准曲线定量 IDS 蛋白浓度。
产品参数:
产品名称 | 大鼠艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E1636 |
英文名称 | IDS ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:最低检测灵敏度≤0.3ng/mL
检测范围:0.6ng/mL - 60ng/mL
反应时间:样本孵育90分钟,酶标抗体孵育60分钟,显色20分钟
保存条件:试剂盒2-8℃冷藏保存,禁止冷冻,试剂开封后密封防潮
有效期:未开封有效期6个月
显色系统:高稳定性TMB显色系统,显色均匀,背景值低
检测波长:450nm检测,630nm校正背景干扰
标准曲线绘制:以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,四参数拟合绘制标准曲线,计算样本酶含量
特异性:特异性结合大鼠IDS,与其他糖酯酶、水解酶无交叉反应
重复性:板内变异系数≤8%,板间变异系数≤10%
注意事项:1. 组织匀浆样本需充分离心去除杂质;2. 试剂恢复室温后混匀再使用;3. 严格控制孵育温度与时间,保证反应充分;4. 避免试剂交叉污染。
通用注意事项:
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
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实验操作流程:
试剂平衡:试剂盒室温平衡 21min,20 倍洗涤液稀释混匀,按需拆分酶标板。
标准品稀释:IDS 冻干标准品溶解配置 6 组梯度,空白对照孔设置。
样本上样:标准孔 50μL 梯度标准液,肝肾组织匀浆样本 50μL 上样。
孵育反应:每孔 50μL HRP 标记 IDS 抗体,封膜 37℃避光孵育 56min。
洗板:洗涤液浸泡 29s,拍干,洗板 5 次。
显色:TMB 底物各 50μL,避光 37℃反应 13min。
终止检测:终止液混匀,6min 内 450nm 读数,计算 IDS 酶含量。
关键字: 大鼠艾杜糖硫酸酯酶;IDS;ELISA试剂盒;
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