ATCC 14028鼠伤寒沙门氏菌：食品安全检测与药典控制菌检查的标准菌株

做食品微生物检测的同行对ATCC 14028这株鼠伤寒沙门氏菌应该都很熟悉。它是国内食品和药品质控实验室使用频率最高的沙门氏菌标准菌株之一，广泛用于GB 4789.4、ISO 6579、USP及中国药典控制菌检查等场景。本文结合笔者多年的实验室管理经验，梳理该菌株的生物学特性、操作要点和在各标准中的应用，供同行参考。

菌株基本信息

ATCC 14028的完整分类学名称为 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium，属于肠杆菌科沙门氏菌属。该菌株另有编号CDC 6516-60，最初分离自美国，目前由美国典型培养物保藏中心（ATCC）提供标准化供应。其血清学抗原公式为I 4,5,12:i:1,2，即O抗原群B（O4、O5、O12），第一相H抗原为i，第二相H抗原为1,2。这个抗原组合在Kauffmann-White-Le Minor分型方案中属于经典的B群沙门氏菌，也是食品和环境监测中最常见的血清型之一。该菌株的生物安全等级为BSL-2，属于条件致病菌，操作时须在生物安全柜中进行。

生物学特性与形态

ATCC 14028为革兰氏阴性短杆菌，周生鞭毛，动力阳性。镜检可见典型阴性杆菌形态，散在或成对排列。在血平板上可表现出溶血表型，这一点与部分其他沙门氏菌血清型有所不同，鉴别时可作为参考。

生化鉴定方面，该菌株在TSI上表现为碱性斜面/酸性底层（K/A），产H2S使培养基变黑，是沙门氏菌属的经典反应模式。赖氨酸脱羧酶阳性、吲哚阴性、柠檬酸盐阳性、尿素酶阴性，这些特征构成了传统鉴定方案的核心判据，也是日常质控中确认菌种活力的重要参考。

培养条件与操作要点

ATCC 14028的推荐培养基包括营养琼脂（ATCC Medium 3，即Nutrient Agar）、胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）和营养肉汤（Nutrient Broth），培养温度为37°C。在营养琼脂上培养18~24小时后，菌落呈灰白色、圆形、边缘整齐、表面光滑湿润，直径约2~3 mm。

在选择性培养基上的表现是该菌株作为质控菌的核心价值所在。在亚硫酸铋琼脂（BS agar）上，ATCC 14028形成黑色菌落，周围有明显的金属光泽，这是产H2S与亚硫酸铋反应的结果，也是BS琼脂质控验收时必须观察到的典型特征。在SS琼脂（Salmonella-Shigella Agar）上，菌落中央黑色、边缘透明或半透明。在XLD琼脂（木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂）上，菌落呈红色带黑色中心，这是赖氨酸脱羧酶活性和H2S产生的共同表现。

每次使用新批次的选择性培养基时，我都会用ATCC 14028做菌落特征验证。按照GB 4789.28的要求，需同时验证目标菌的生长能力和非目标菌的抑制效果，ATCC 14028就是沙门氏菌选择性培养基质控的首选菌株。

在食品安全检测中的应用

ATCC 14028在食品安全检测中最核心的应用是GB 4789.4《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》。该标准涵盖预增菌、选择性增菌、选择性平板分离、生化鉴定和血清学鉴定五个步骤。ATCC 14028作为阳性对照菌株贯穿整个流程：验证增菌液的支持能力，验证TTB和SC增菌液的选择性，以及BS、XLD、HE等平板的性能。

ISO 6579系列标准同样将鼠伤寒沙门氏菌作为方法验证和实验室间比对的关键菌株。ISO 6579-1:2017的检测流程与GB 4789.4在原理上高度一致，ATCC 14028在国际能力验证（proficiency testing）中被广泛使用。笔者所在实验室每年参加的能力验证项目中，沙门氏菌定性检测的考核样品几乎都用这株菌做内部预实验。

在药典控制菌检查中的应用

在药品微生物控制领域，沙门氏菌是必检控制菌之一。USP通则<62>规定了非无菌药品中沙门氏菌的检查方法，采用RV增菌液选择性增菌后转种至选择性琼脂平板。ATCC 14028被USP指定为方法适用性试验的阳性对照菌。

《中国药典》2020年版四部通则1106"控制菌检查法"中，沙门氏菌检查同样以鼠伤寒沙门氏菌为对照菌株。流程为：样品在TSB中预培养，转种RV增菌液，再划线接种XLD等平板。对照试验要求接种50~100 CFU目标菌，规定条件下应能检出。若ATCC 14028未能检出，说明增菌或平板存在问题，该批检测结果无效。

在各药典及标准中的应用

除USP和《中国药典》外，ATCC 14028在欧洲药典（EP 2.6.13）和日本药局方中也有类似应用。各药典的技术路线基本一致，区别主要在增菌液配方和选择性平板的选择上。EP推荐RV增菌液配合改良brilliant green agar，部分实验室则偏好XLD和HE琼脂组合。无论哪种方案，ATCC 14028的质控菌株地位都是各药典共同认可的。此外，在《消毒技术规范》的杀灭效果评价中，该菌也用作评估消毒剂对革兰氏阴性肠道致病菌杀灭能力的代表菌种。

在行业质控中的典型用途

在日常质控中，ATCC 14028主要用于培养基质量验证。按照GB 4789.28的要求，每批次选择性培养基都需用标准菌株做性能测试，验证BS、SS、XLD、HE等平板的检出能力和菌落特征。

此外，在CNAS认可实验室的能力验证和人员考核中，ATCC 14028制备的标准样品或人工污染样品是常用载体。该菌株在环境监测、水质分析以及临床诊断试剂验证中也常被用作阳性对照。

菌种保藏与传代管理

ATCC 14028的保藏管理直接关系到实验室检测结果的可靠性。笔者的做法是：收到冻干菌种后，在营养琼脂上复苏培养，确认菌落形态和纯度，然后制备甘油冻存管（15%~20%甘油），分装后保存于-80°C超低温冰箱作为原始菌种库（master stock）。工作菌种（working stock）从原始菌种库中取出，在营养琼脂上活化后短期使用，保存于2~8°C冰箱，使用期限不超过一个月。

传代次数是质控管理中的关键控制点。按照一般实验室规范，工作菌种的传代次数不应超过5代。过度传代会导致菌株的抗原表达下降，尤其是H抗原（鞭毛抗原）的不稳定性在沙门氏菌中较为常见，直接影响血清学鉴定结果。每代菌种都应做好详细的使用记录，包括传代日期、操作人员、菌落形态观察和必要的生化确认。

操作安全与注意事项

ATCC 14028属于BSL-2操作对象。该菌株虽在实验室条件下毒力相对温和，但鼠伤寒沙门氏菌本身是人类胃肠炎的重要病原菌，可引起食物中毒和全身感染。所有活菌操作必须在II级生物安全柜中进行，操作人员须穿戴实验服、手套，必要时佩戴口罩和护目镜。

实验结束后的废弃物处理同样不容忽视。使用过的培养物、吸头、离心管等须经过121°C高压灭菌至少30分钟后方可按医疗废物处置。工作台面和操作区域在实验结束后用有效氯浓度不低于1000 mg/L的含氯消毒剂或75%乙醇进行彻底消毒。如果发生菌液溢洒，应按照实验室生物安全应急预案处理，先覆盖吸水材料，再倾倒消毒剂，作用30分钟后清理。

常见问题与工程师建议

在日常工作中，有几个问题值得特别注意。第一是抗原稳定性问题。ATCC 14028的H抗原在反复传代后可能出现变异或丢失，导致血清学凝集反应减弱甚至阴性。建议严格控制传代次数，并在每批次工作菌种启用时做血清学确认。如果凝集反应不理想，可以通过半固体琼脂穿刺培养来恢复鞭毛表达。

第二是选择性培养基的批间差异。不同厂家、不同批次的BS琼脂在亚硫酸铋含量上可能有波动，直接影响菌落特征。我遇到过个别批次BS平板上金属光泽不明显的情况，后来确认是培养基质量问题。培养基质控不能流于形式，必须每批次都做。

第三是复苏培养的注意事项。冻干菌种复苏时，建议先在少量液体培养基中37°C静置水合15~20分钟，然后再转种至固体培养基。直接接种到固体平板上虽然也能复苏，但成功率和水合后再转种相比会有所降低。复苏后的第一代培养物建议多划几块平板，挑选单菌落进行后续操作，确保菌种纯度。

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免责声明： 本文所述菌株信息及技术参数均来源于ATCC官网、美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、《中国药典》2020年版、ISO国际标准、GB 4789系列国家标准及《消毒技术规范》等公开权威资料，仅供专业技术参考。具体实验操作请以产品随附的质检报告(COA)和说明书为准，并严格遵守所在机构的生物安全管理制度。本文不构成任何产品推荐或使用建议。

关键词标签: ATCC 14028, 鼠伤寒沙门氏菌, Salmonella Typhimurium, 标准菌株, 食品检测, GB 4789.4, 药典, 控制菌