本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理,酶标板微孔包被有小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)特异性捕获抗体。检测时,样本、标准品中的GFAP抗原与固相抗体特异性结合,洗涤去除未结合杂质后,加入辣根过氧化物酶标记的GFAP检测抗体,形成特异性免疫夹心复合物。经洗涤纯化反应体系后,加入TMB底物显色,显色深浅与样本中GFAP蛋白含量成正比,终止反应后测定吸光度,结合标准曲线即可精准定量样本中目标蛋白的含量。
基本参数:

产品名称:小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒
英文名称:GFAP ELISA Kit
货号:Y-E2307
规格:48T/96T
灵敏度:最小检出 0.07ng/mL
检测范围:0.14ng/mL~36ng/mL
反应时间:37℃孵育 88min,酶结合物 51min,底物显色 19min,终止检测,合计 158min
保存条件:整套试剂盒 2~8℃;未用完板条密封防潮冷藏,不可室温放置超过 2h
显色系统:预制单组份 TMB 显色液
检测波长:450nm 参比 650nm
标准曲线绘制:双复孔测 OD 值,剔除异常值后四参数拟合标准曲线
注意事项:脑组织样本冰上操作防止蛋白降解;溶血样本直接弃用,不可检测。
通用注意事项:

样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下:

试剂盒室温放置 22min 平衡组分,稀释洗涤液,梯度稀释 GFAP 标准品。
酶标板加样标准品、脑组织匀浆上清样本、空白对照液。
直接加入酶偶联抗体工作液,封板 37℃孵育 54min。
洗板 5 次,浸泡 33s / 轮,拍干微孔残留液体。
避光显色 13min。
终止液终止反应,混匀微孔内液体。
读板拟合标准曲线,计算 GFAP 蛋白浓度。
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