本试剂盒专为反刍兽专属曼氏杆菌设计检测体系，针对反刍动物源曼氏杆菌保守基因设计引物，可广谱且特异性检测牛羊等反刍动物体内的曼氏杆菌病原核酸。产品兼顾广谱性与准确性，可覆盖反刍动物常见致病曼氏杆菌菌株，检测速度快、操作简单，适合规模化养殖场批量样本筛查、临床感染确诊、跨区域疫病监测等工作。
产品名称 | 反刍兽曼氏杆菌PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P014401 |
英文名称 | Mannheimia ruminalisPCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
牛羊呼吸道混合菌样本提取总 DNA，通用引物靶向反刍兽源曼氏杆菌共有保守基因扩增。
多重扩增体系搭配内参引物，同时检测宿主动物管家基因，确认样本取材有效。
扩增产物毛细管电泳检测，依据核酸片段长度判定是否存在反刍兽曼氏杆菌。
操作步骤：
1. DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。
3. PCR反应体系配制（试剂配制区）
按以下比例配制（示例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
注意事项：
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区，各区实验服、移液器及耗材严禁混用，防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头，每步更换枪头；
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；
加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存，避免反复冻融，确保稳定性；
使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。
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