产品名称：HN禽流感荧光定量PCR检测试剂盒（不含反转录）
英文名称：HN Avian Influenza Fluorescence Quantitative PCR Detection Kit (Without Reverse Transcription)
货号：YS-P014941
分类：PCR检测试剂盒
规格：50T/盒
检测原理：
引物靶向禽流感 HN 基因特异性区段，仅扩增携带 HN 基因的禽流感病毒核酸。
试剂盒不含反转录试剂，仅可直接以前期已制备完成的病毒 cDNA 作为模板进行扩增。
扩增过程荧光信号随产物累积增强，依靠荧光 Ct 值定量判断病毒核酸载量高低。
实验流程：
样本制备：
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制（20 μL体系示例）：
预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特异性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。
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注意事项：
分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染
无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服
试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心
避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作
防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台
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