BF750标记的磷酸化蛋白激酶B抗体
原理特点
本抗体采用BF750近红外荧光标记，该染料抗光漂白能力强、长波长荧光干扰极低，与磷酸化AKT特异性抗体偶联，仅识别磷酸化活化态的蛋白激酶B，不结合总AKT蛋白。磷酸化AKT是PI3K/AKT信号通路的核心活化指标，直接调控细胞增殖、代谢、凋亡及肿瘤发生发展，该抗体位点特异性极强，可精准区分蛋白活化与非活化状态，近红外荧光适配高灵敏度组织成像与多色共聚焦实验，是信号通路活化水平定量研究的优质工具。
英文名称:phospho-AKT1 (Ser473) Rabbit pAb, BF750 conjugated
中文名称:BF750标记的磷酸化蛋白激酶B抗体
英文别名：Akt(phospho-Ser473); AKT(phospho-S473); AKT(phospho Ser473); p-AKT(Ser473); AKT 1; AKT; AKT1; AKT-1; AKT1_HUMAN; C AKT; cAKT; MGC9965; MGC99656; Oncogene AKT1; PKB; PKB alpha; PKB-ALPHA; PRKBA; Protein Kinase B alpha; Protein kinase B; Proto-oncogene c-Akt; RAC alpha; RAC alpha serine/threonine protein kinase; RAC; RAC PK alpha; Rac protein kinase alpha; RAC Serine/Threonine Protein Kinase; RAC-alpha serine/threonine-protein kinase; RAC-PK-alpha; v akt murine thymoma viral oncogene homolog 1; vAKT Murine Thymoma Viral Oncogene Homolog 1.
标记物：BF750（近红外荧光染料 Biorbyt 系列，长波长，背景低、多色流式兼容）
靶标：磷酸化 AKT（Ser473/Thr308 位点，活化型蛋白激酶 B）
抗体类型：兔多克隆 IgG
种属：人、小鼠、大鼠
应用：流式 FCM、免疫荧光 IF、ICC
通路功能：PI3K/AKT 增殖存活通路核心，检测细胞增殖、耐药、肿瘤信号激活水平
储存：-20℃避光分装，避免反复冻融
靶点背景
1. AKT（PKB）是 PI3K 下游关键丝氨酸 / 苏氨酸激酶，磷酸化修饰为其活化形式
2. 活化 AKT 调控细胞存活、增殖、糖代谢、血管生成，抑制细胞凋亡通路
3. 肿瘤、代谢疾病研究核心靶点，检测通路激活水平、靶向药药效评价
核心实验操作方法
1. Western Blot（WB）
抗体孵育
一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。
洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。
显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。
2. 免疫组化（IHC）
抗体孵育
一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。
显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。
3. 免疫荧光（IF）
抗体孵育
一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。
观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。
4. ELISA实验
包被与孵育
包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。
封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。
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