产品属性
产品名称 | IRDye 800CW标记的紧密连接蛋白1重组小鼠单抗 | 货号 | YS-K9630 |
英文名称 | CLDN1 Recombinant Mouse mAb, IRDye 800CW conjugated | 用途 | 仅供科研实验 |
商品介绍
英文别名：CLD1; ILVASC; SEMP1; CLD1_HUMAN; CLDN1; Senescence-associated epithelial membrane protein;
基础属性
靶蛋白：ZO-1（紧密连接蛋白 1）
抗体类型：重组小鼠单克隆抗体
荧光标记：IRDye 800CW（近红外荧光，激发 778nm，发射 794nm，双色红外 WB 标配）
靶蛋白功能
上皮 / 内皮细胞紧密连接核心支架蛋白，维持细胞屏障完整性；屏障损伤、炎症、血管渗漏、肿瘤侵袭评价指标。
适用实验
近红外双色 Western Blot、组织荧光成像、IF、IHC
适用物种：人、小鼠、大鼠
原理特点
该重组小鼠单抗偶联IRDye 800CW近红外荧光染料，特异性识别紧密连接蛋白ZO-1，ZO-1是上皮、内皮细胞屏障的核心支架蛋白，维持细胞紧密连接完整性，调控组织屏障通透性与细胞极性。近红外荧光背景极低、穿透力强，适合活体组织成像、近红外WB检测、高灵敏度免疫荧光染色，可精准评价细胞屏障损伤与重塑状态，广泛用于炎症屏障损伤、肿瘤侵袭研究。
靶点背景
1. ZO-1 是紧密连接支架蛋白，定位于上皮、内皮细胞间连接复合体部位
2. 交联跨膜紧密连接蛋白，维持细胞屏障完整性、调控细胞旁通透性
3. 血脑屏障、肠道屏障、血管内皮屏障损伤、上皮通透性检测标志物
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核心实验操作方法
1. Western Blot（WB）
抗体孵育
一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。
洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。
显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。
2. 免疫组化（IHC）
抗体孵育
一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。
显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。
3. 免疫荧光（IF）
抗体孵育
一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。
观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。
4. ELISA实验
包被与孵育
包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。
封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。
关键字： IRDye 800CW标记的紧密连接蛋白;CLDN1 Recombinant Mo;100ul;
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