北京生夏蛋白技术有限公司/北京华利世
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说明: Sortase A 转肽酶是采用大肠杆菌体系表达的蛋白酶。特异性识别 LPXTG 序列的苏氨酸和甘氨酸之间切割。可用于将具有 C 端 LPETGX 基序的蛋白质 / 肽与其它具有甘氨酸或氨基亚甲基基序的蛋白质或分子进行位点特异性连接。该工具酶用于蛋白质化学修饰,连接,环化等。物理形态:含 82ug 醋酸钠,0.3mg 海藻糖 干粉分子量: 20.8kDa.存储条件: −20 ℃冰箱冷冻.保质期 : 24 个月 在 −20℃冰箱溶解液:用 100ul 超纯水溶解酶促反应缓冲液 : 250mM HEPES , 150mM NaCl , 25mM CaCl₂ , pH7.4转肽实验方法:- 取 25ul 0.5mg/mL 样品,加 10uL 酶促反应缓冲液,再加 2uL 10ug/uL 转化底物,加 1uL 0.5ug/uL sortaseA 蛋白酶,补加 12uL 的超纯水混合,总反应体积为 50uL , 30℃孵育 30min 反应。
纯度:液相色谱 280nm 检测检测杂质蛋白质峰强度,Sortase A 蛋白酶色谱峰强度大于 99.0%
转化率:转肽底物 6Gly 和 Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP TFA 样品按照质量比 50:1 与转肽酶反应、30℃孵育 30min, 转化率为 78%。LC-MS/MS 质谱分析转肽特异性。
环化率: IL29-ADC 样品与转肽酶按照质量比 500:1 反应、30℃孵育 16H , 样品环化率为 98%。LC-MS/MS 质谱分析环化特异性。
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