小鼠丙酮酸脱氢酶激酶同工酶3(PDK3)重组蛋白 新品

小鼠丙酮酸脱氢酶激酶同工酶3(PDK3)重组蛋白适用于线粒体糖代谢调控、缺氧代谢适应、肿瘤及糖尿病相关激酶活性评价实验。

型号：YS-DB2222

产品名称：小鼠丙酮酸脱氢酶激酶同工酶3(PDK3)重组蛋白

物种：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名称：Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 3 (PDK3)

PDHK3; [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 3, mitochondrial

酶与激酶

物种：Mus musculus (Mouse，小鼠)

来源：原核表达

宿主E.coli

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)

亚细胞定位：：n/a

预测分子量：33.1KDa

实际分子量：-(差异分析请参阅说明书)

片段与标签：Gly138~Pro396 with

缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性状：冻干粉

纯度：> 95%

等电点：-

应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
检测原理：

靶肽磷酸化比色定量原理：PDK3 介导靶多肽丝氨酸 / 苏氨酸位点磷酸化，磷酸特异性染料结合磷酸化底物产生吸光值变化，定量激酶催化活性。

Western Blot 免疫特异性鉴定：PDK3 专属抗体特异性识别重组蛋白，排除非特异性杂带，确认目的蛋白表达正确。

剩余 ATP 生物发光检测：反应消耗 ATP，剩余 ATP 与荧光素酶反应产生荧光信号，信号强弱反向表征 PDK3 激酶活力。

电泳灰度纯度分析：SDS-PAGE 分离蛋白组分，灰度分析计算目的蛋白纯度，评估蛋白降解、聚合、杂蛋白污染情况。
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常见实验场景操作指南：

细胞培养实验

浓度优化：先设置预实验梯度（如0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），检测细胞增殖、分化或信号通路激活情况，确定最优工作浓度。

添加时机：细胞接种后24-48小时，待细胞贴壁且状态稳定时添加重组蛋白。

更换培养基：若蛋白半衰期较短，需每隔24-48小时更换含新鲜蛋白的培养基。

免疫检测实验

阳性对照设置：在ELISA或WB实验中，用已知浓度的重组蛋白制备标准曲线，确保定量准确性。

封闭处理：若蛋白用于包被ELISA板，包被后需用5%脱脂牛奶或BSA封闭，降低非特异性结合。

抗体配对：选择针对不同表位的捕获抗体和检测抗体，避免与重组蛋白的标签产生交叉反应。

蛋白相互作用实验

标签选择：若使用Pull-down实验，优先选择GST或His标签的重组蛋白，便于亲和层析分离。

反应条件：在生理缓冲液（如PBS）中进行，温度控制在4℃，避免蛋白变性。

阴性对照：设置不含目标蛋白的对照组，排除标签非特异性结合的干扰。