双抗体夹心 ELISA,固相载体包被 PⅠCP 捕获抗体,样本中 Ⅰ 型前胶原羧基端肽特异性结合板底,酶标检测抗体结合靶抗原,洗板后底物显色,吸光度数值反映样本 PⅠCP 浓度,用于胶原合成水平检测。
产品参数:
产品名称 | 大鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E1418 |
英文名称 | PⅠCP ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:最低检测限0.21ng/mL,胶原合成标志物专属检测
检测范围:0.42ng/mL - 42ng/mL
反应时间:总时长95分钟,样本孵育65分钟,二抗孵育30分钟
保存条件:2-8℃避光保存,所有试剂禁止冷冻暴晒
有效期:未开封原装6个月有效期
显色系统:稳定型TMB显色底物,显色梯度规整
检测波长:450nm主波长检测
标准曲线绘制:6梯度标准品,四参数拟合,R²≥0.996
特异性:特异性识别PⅠCP,与其他亚型胶原端肽无交叉反应
重复性:板内CV≤4.8%,板间CV≤6.8%
注意事项:样本新鲜制备,避免反复冻融;孵育温度恒定37℃,保证抗原抗体结合效率
通用注意事项:
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
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实验操作流程:
试剂平衡:试剂室温放置 23min,浓缩洗涤液 1:20 稀释,组织上清室温回暖。
标准品稀释:PⅠCP 标准品溶解梯度稀释 6 浓度,空白孔仅加稀释液。
加样孵育:50μL 标准品 / 样本 + 50μL HRP 酶抗体,封膜 37℃避光孵育 58min。
洗板操作:洗涤液浸泡 30s,拍干,洗板 5 次。
底物显色:底物 A、B 各 50μL,避光孵育 13min。
终止读数:终止液混匀,8min 内检测 OD450。
数据计算:曲线定量 PⅠCP,评估组织胶原合成代谢。
关键字: 大鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽;PⅠCP;ELISA试剂盒;
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