大鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶免疫检测技术，以包被于酶标板的大鼠MMP-3特异性抗体为固相载体，捕获样本中的MMP-3抗原分子。加入待测样本及标准品孵育后，抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合成分，再加入HRP标记的MMP-3检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体三元复合物。底物显色、终止反应后，利用酶标仪检测各孔吸光度，样本OD值与MMP-3浓度呈线性正相关，通过标准曲线拟合计算，可精准定量大鼠血清、组织或细胞样本中MMP-3的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.08ng/mL

检测范围：0.15ng/mL - 9ng/mL

反应时间：总反应时长120min（样本孵育60min、酶标二抗孵育30min、显色30min）

保存条件：试剂盒2-8℃保存，标准品、浓缩试剂密封单独存放，禁止冷冻

有效期：未开封12个月，开封后试剂1个月内用完

显色系统：TMB底物-过氧化氢显色体系

检测波长：450nm，可搭配620nm参比校正

标准曲线绘制：设置6个梯度标准浓度，检测OD值，四参数Logistic回归拟合曲线，用于样本浓度换算

特异性：特异性靶向大鼠MMP-3，与其他基质金属蛋白酶及炎症因子无交叉识别

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：全程避光操作，避免底物氧化；样本稀释比例需精准，超范围样本需重新稀释检测
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温放置 28min，稀释浓缩洗涤液，制备梯度 MMP-3 标准品，固定使用酶标板条数。

标准孔加梯度标准品 50μL，待测孔加入经稀释处理的大鼠生物样本 50μL，空白孔仅加稀释液。

所有孔加入酶标记抗体 100μL，覆膜封板，37℃恒温孵育 70min。

弃液洗板，每孔加满洗涤液浸泡 35s，甩掉液体，连续洗板 5 次，吸水纸拍干微孔。

避光添加显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 18min。

每孔滴加终止液 50μL，终止底物显色反应。

450nm 波长测 OD 值，根据标准曲线定量样本 MMP-3 浓度。