蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原（vtg)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板预先包被蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原（vtg）特异性捕获抗体，待测样本中的vtg抗原与固相抗体特异性免疫结合，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成稳定的免疫夹心复合物，酶促底物显色后的显色深浅与样本中vtg含量成正比，结合标准曲线可精准定量蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出浓度0.09ng/mL，适配昆虫体内微量卵黄蛋白原精准检测。

检测范围：0.18ng/mL - 85ng/mL，覆盖蝶蛹金小蜂不同发育阶段vtg表达浓度。

反应时间：总实验时长95分钟，昆虫样本专属孵育45分钟，显色反应20分钟。

保存条件：2-8℃密封避光保存，昆虫蛋白检测试剂需防潮防污染。

有效期：未开封有效期11个月，昆虫特异性试剂稳定性周期略短。

特异性：专一识别蝶蛹金小蜂vtg，与其他昆虫卵黄蛋白原无交叉反应。

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，昆虫生理实验数据稳定。

注意事项：昆虫样本需低温研磨提取，常温放置易导致vtg蛋白降解；样本避免反复冻融。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒提前 30min 回温，稀释洗涤液，标记空白、标准、待测样本孔位。

梯度稀释 vtg 标准品，昆虫体液样本离心取上清稀释，每孔加 50μL 液体。

所有检测孔直接加入酶标二抗工作液 100μL，覆膜封板。

37℃避光孵育 60min，固相抗体捕获靶标蛋白并结合酶标物。

洗板 6 次，每孔加满洗涤液静置 30s，倒扣拍干微孔。

避光依次加入显色 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃显色 15min。

加入终止液终止反应，450nm 测定吸光值，对照标准曲线得出 vtg 含量。