人α-辅肌动蛋白3(ACTN-3)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA技术原理，微孔板固相包被人α-辅肌动蛋白3（ACTN-3）特异性捕获抗体，样本中的ACTN-3抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质与多余蛋白后，加入辣根过氧化物酶标记的ACTN-3检测抗体形成免疫复合物，经洗涤纯化后酶促显色，终止反应后测定吸光度，以此定量检测样本中ACTN-3的浓度水平。
产品参数：

‌1.灵敏度：检出下限≤3.2pg/mL

2.检测范围：6.4pg/mL - 204.8pg/mL

3.反应时间：孵育 64min，二抗 33min，显色 11min

4.显色系统：预混即用 TMB 底物

5.检测波长：450nm，参比 650nm

6.特异性：专一识别人 ACTN-3，与 ACTN1/2/4 亚型无交叉结合

7.重复性：批内 CV≤5.4%，批间 CV≤8.1%

8.注意事项：组织裂解样本需添加蛋白酶抑制剂，防止靶蛋白降解
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂盒组分室温回温 34min，按配比稀释浓缩洗涤液，标准品用稀释液梯度稀释，组织上清样本备用。

2. 排布空白、标准、样本孔，标准孔加梯度标准品 50μL，样本孔加入待测样本 50μL，空白孔不加任何试剂。

3. 非空白孔每孔加入酶标记二抗工作液 100μL，封板膜封口，轻摇酶标板混匀液体。

4. 37℃密闭孵育 69min，避免频繁开启孵育箱造成温度波动。

5. 撕除封板膜，弃液后洗涤液浸泡 33s 甩干，重复洗板 6 次，洗去非特异性结合物。

6. 避光滴加显色 A、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 14min。

7. 加入终止液终止反应，10min 内酶标仪读数，换算标准曲线得到 ACTN-3 蛋白浓度。