人胆酸(CA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法ELISA检测原理，酶标板预先包被人胆酸固相抗原，待测样本中的胆酸抗原与固相抗原竞争结合限量的特异性抗体，洗涤后加入酶标记二抗催化底物显色，样本中胆酸含量越高，显色吸光度越低，终止反应后依据标准曲线反向定量样本中胆酸的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人胆酸(CA)ELISA试剂盒

英文名称：CA   Elisa Kit
货号：Y-E355

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测 0.03μmol/L

检测范围：0.08μmol/L - 3.2μmol/L

反应时间：结合孵育 50min，显色反应 30min，总 80min

显色系统：生化偶联显色体系，非 TMB 显色

检测波长：492nm 单波长读数

特异性：对游离胆酸特异，与鹅脱氧胆酸交叉反应＜4%

重复性：板内 CV＜5.8%，板间 CV＜7.0%

注意事项：胆汁样本需稀释处理，避免浓度超出标准曲线线性区间
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温复温 40min，配制洗涤工作液，划分酶标板标准孔、样本孔、空白孔并标注。

胆酸 CA 梯度标准品每孔添加 50μL，胆汁、血清样本稀释后上样 50μL，空白孔加入等量稀释液。

各微孔加入酶标记反应工作液 100μL，覆膜封板，前后摇晃酶标板混匀液体。

37℃恒温密闭孵育 69min，全程避光放置。

洗板 6 次，单次浸泡 31s，倒扣甩干废液，吸水纸按压板底去除残液。

避光加入显色底物 A、B 各 50μL，混匀后室温避光显色 23min。

加入终止液终止酶促显色，450nm 波长检测 OD 值，依托标准曲线计算胆酸含量。
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