本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将特异性抗人FZD8单克隆抗体包被于酶标板微孔内，加入待测样本、标准品后，样本中的FZD8抗原会与包被抗体特异性结合，洗去未结合物质后，加入酶标记的FZD8二抗，形成“包被抗体-抗原-酶标抗体”的免疫复合物，再次洗涤去除游离组分，加入底物显色液进行显色反应，最终通过酶标仪测定各孔吸光度值，结合标准曲线即可精准计算出样本中人FZD8的含量。
基本参数：
产品名称：人卷曲蛋白8(FZD8)ELISA试剂盒
英文名称：FZD8 ELISA Kit
货号：Y-E2954
规格：48T/96T
灵敏度：最低可检测 0.08ng/mL
检测范围：0.15–10ng/mL
反应时间：样本孵育 60min，洗板 5 次，二抗孵育 30min，底物避光显色 15min，终止后立即读数，总耗时约 110min
保存条件：未拆封试剂盒 2–8℃避光储存；开封后板条密封 2–8℃可存 4 周，底物液需单独避光冷藏，严禁冻融
显色系统：TMB 单组份显色液，HRP 酶促显色
检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm
标准曲线绘制：以标准品浓度为 X 轴，对应 OD 值为 Y 轴，采用四参数 Logistic 拟合生成标准曲线，样本浓度由曲线回算
注意事项：全程避免强光直射底物；板孔不可交叉加样；洗板务必彻底防止非特异性结合；血清样本需无溶血、无脂血
关键注意事项：
实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）
避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果
显色过程需避光，避免阳光直射影响结果
实验步骤如下：
样本准备
血清样本室温静置 30min 自然凝固，3000r/min 离心 15min 分离上清；细胞上清、组织匀浆样本 12000r/min 离心 10min 去除沉淀，样本若不能当日检测分装后 - 20℃避光冻存，避免反复冻融，检测前室温复融混匀。
试剂盒试剂复温
取出酶标板、浓缩洗涤液、标准品、生物素标记抗体液、HRP 亲和素、显色液、终止液全部试剂，放置室温环境平衡 30min；浓缩洗涤液按标注比例用蒸馏水稀释配制工作洗涤液，混匀备用。
标准品梯度稀释
取标准品干粉加入配套标准品稀释液充分溶解混匀，设空白孔、零孔及 6 个浓度梯度标准孔；依次倍比稀释配制梯度标准品，每孔加入对应梯度标准品 50μL，零孔仅加标准品稀释液 50μL，空白孔后续不加任何抗原抗体反应液。
样本加样孵育
待测样本孔每孔加入稀释后待测样本 50μL，随即每孔加入生物素标记 FZD8 抗体工作液 50μL，封板膜密封酶标板，37℃恒温孵育 60min。
洗板除杂
揭去封板膜，甩掉孔内液体，每孔加满稀释后洗涤液，浸泡 30s 后拍干，重复洗板操作共计 5 次，每次洗板后在吸水纸上充分拍净孔内残留液体，杜绝交叉污染。
显色反应
每孔加入 HRP 亲和素工作液 100μL，封板后 37℃避光孵育 30min；再次洗板 5 次并拍干，每孔先后加入显色液 A、显色液 B 各 50μL，轻柔震荡混匀，37℃避光显色 15min。
终止与读数
每孔快速加入终止液 50μL 终止酶促显色反应，酶标仪设置 450nm 波长，15min 内测定各孔 OD 吸光度值，根据标准品浓度与对应 OD 值绘制标准曲线，换算计算样本中 FZD8 蛋白含量。
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