人肝癌抗原(PHC)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测技术，酶标板固相包被人肝癌抗原特异性捕获抗体，孵育时样本中的PHC抗原与包被抗体特异性结合，再加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体形成特异性免疫复合物，洗板去除未结合组分后催化底物显色，显色深浅与样本中肝癌抗原含量成正比，对照标准曲线可精准定量PHC浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 1.8U/mL

检测范围：6U/mL～192U/mL

反应时间：样本孵育 75min，二抗 50min，避光显色 19min

显色系统：预制单液显色底物

检测波长：450nm

特异性：主要识别肝癌特异性抗原，与 AFP 轻度同源无明显交叉干扰

重复性：板内 CV≤8.8%，板间 CV≤11%

注意事项：黄疸重度血清样本不宜检测；读数需在终止后 3 分钟内完成
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

整套试剂盒室温平衡 30min，梯度稀释标准品，酶标板划分实验组别，每孔上样 50μL，空白孔空置不加液。

每孔加入一步法酶结合液 100μL，封板封口，手动横向摇晃酶标板混匀。

37℃避光孵育 65min，孵育环境避免光照直射。

倒掉孔内反应废液，洗涤液注满每孔静置 34s 倒掉，洗板 5 次，充分拍干微孔水分。

每孔加入显色混合底物液 100μL，37℃避光显色 18min。

加入终止液 50μL 摇匀终止显色反应。

450nm 波长读取 OD 值，对照标准曲线计算肝癌抗原含量。