本试剂盒采用间接ELISA检测原理,固相酶标板包被纯化的肺泡基底膜抗原,加入待测样本后,样本中的抗肺泡基底膜抗体与固相抗原特异性免疫结合,洗板清除未结合物质,加入酶标记抗人二抗特异性结合,经显色、终止反应后检测吸光度,依托标准曲线定量检测样本中ABM-Ab的浓度水平。
基本参数:

产品名称:人抗肺泡基底膜抗体(ABM-Ab)ELISA试剂盒
英文名称:ABM-Ab Elisa Kit
货号:Y-E438
规格:48T/96T
灵敏度:0.1IU/mL
检测范围:0.2–19IU/mL
反应时间:样本孵育 90min,二抗 60min,显色 16min,总 166min
保存条件:整套试剂 2~8℃,洗涤液可室温长期存放
显色系统:双组份 TMB 混合显色
检测波长:450nm,参比 620nm
标准曲线绘制:五梯度标准品线性回归生成标准曲线计算浓度
注意事项:肺出血肾炎综合征特异性指标;样本不可高温灭活处理
通用注意事项:

样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下:

样本处理
血清样本 3000rpm 离心 15min 取上清,肺泡灌洗液样本过滤后离心取上清检测。
试剂室温适配
整套试剂室温静置 31min,浓缩洗涤液按照比例蒸馏水稀释搅拌均匀。
标准品系列配制
ABM 抗体标准品复溶倍比稀释 7 梯度,每标准微孔加样 50μL,设置阴性对照孔。
样本共孵育反应
待测样本 50μL,加入生物素化肺泡基底膜抗原 50μL,封板 37℃孵育 65min。
洗板去除游离结合物
倾倒废液,洗涤液浸泡 40s 拍干,连续洗板 6 次,彻底吸干微孔内液体。
酶促显色孵育
加入 HRP 亲和素孵育 26min,洗板后添加显色液避光显色 15min。
终止上机定量
终止液终止酶反应,450nm 测 OD 值,依据标准曲线计算抗体浓度。
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