人冠状病毒(Coronaviruses IgG)ELISA试剂盒

本试剂盒采用酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法检测人冠状病毒IgG（Coronaviruses IgG）含量，预先将纯化的人冠状病毒抗原包被于微孔板孔底，加入待测样本后，样本中特异性冠状病毒IgG抗体可与固相抗原特异性结合，洗去未结合杂质后，加入酶标记的二抗与结合的人体IgG抗体结合，再次洗涤后加入底物显色液发生显色反应，最后加入终止液终止反应，通过酶标仪测定各孔吸光度值，吸光度值与样本中人冠状病毒IgG含量呈正相关，依据标准曲线即可精准计算样本中目标抗体的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低可检出 1.2ng/mL 样本中冠状病毒 IgG 抗体

检测范围：0.5ng/mL～80ng/mL

反应时间：样本孵育 60min，二抗孵育 30min，整体操作 135min

显色系统：TMB 单组份显色液，终止液 2M 浓硫酸

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

特异性：仅与人冠状病毒 IgG 特异性结合，与流感、呼吸道合胞病毒无交叉反应

重复性：板内 CV＜7%，板间 CV＜10%

注意事项：血清样本需室温静置 30min 分离，溶血样本严禁使用
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 30min，配置洗涤液、样本稀释液、酶结合工作液，取出预包被板条固定于板架。

设置空白孔、阴性对照孔、阳性对照孔、待测样本孔，每孔依次加入对应稀释后样本、阴阳性对照品、空白稀释液。

每孔直接加入酶标记二抗工作液，封板膜封严反应板，室温避光孵育 60min。

揭去封板膜，弃净孔内液体，每孔加满洗涤液静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，最后一次拍干孔内残余液体。

每孔等量加入显色底物 A 液与 B 液，轻柔震荡混匀，室温避光显色 15min。

按顺序快速加入终止液终止酶促显色反应，轻晃酶标板混匀。

酶标仪设定 450nm 波长，测定各孔 OD 吸光度值，根据标准品曲线计算样本 Coronaviruses IgG 浓度。