人果糖1,6二磷酸醛缩酶(FDA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争性ELISA法检测人果糖1,6二磷酸醛缩酶（FDA）含量，微孔板预先包被纯化的人FDA抗原，检测时样本中的FDA抗原与固相包被抗原竞争结合特异性一抗，洗涤后加入酶标记二抗结合一抗，经底物显色、终止反应后检测吸光度，样本中FDA含量越高，竞争结合的一抗越多，固相结合的酶标抗体越少，显色越浅，吸光度值与样本FDA浓度呈负相关，依据标准曲线可定量测定样本中目标酶的含量。
产品参数：

‌灵敏度：检测下限 0.09U/L

检测范围：0.1U/L～65U/L

反应时间：抗原抗体结合 50min，酶促反应步骤合计 85min，总 130min

显色系统：TMB A 液 + B 液混合显色

检测波长：450nm 单波长测定

特异性：特异性识别人醛缩酶同工酶，同工酶间无交叉干扰

重复性：板内变异＜6.2%，板间变异＜9.3%

注意事项：血清样本不可高温灭活，会造成酶蛋白构象破坏
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 28min，按配比稀释浓缩洗涤液，拆分微孔板条，未使用板条密封冷藏。

梯度稀释 FDA 标准品，待测血清样本离心去除沉淀，用样本稀释液稀释处理。

微孔板分孔加入标准品、待测样本、空白液，立刻加入酶标记抗体工作液，覆膜封口。

37℃避光孵育 50min，实现抗原与酶标抗体同步结合包被抗体。

弃净孔内液体，洗涤液加满微孔浸泡 35s，甩干后重复洗板 5 次，孔底彻底拍干。

加入显色底物混合液，37℃避光显色 13min。

加入终止液混匀，450nm 酶标仪读数，根据标准曲线换算样本 FDA 活性及含量。