本试剂盒运用间接酶联免疫吸附试验原理,将纯化的天然脱氧核糖核酸(n-DNA)抗原包被于微孔板固相载体,待测样本中的抗天然DNA抗体可与固相n-DNA抗原特异性结合;孵育反应后洗板清除未结合杂质,加入辣根过氧化物酶标记的抗人二抗与固相上的n-DNA-Ab结合,形成免疫复合物;底物显色后,显色强度与样本中n-DNA-Ab含量正相关,终止反应后检测吸光度,通过标准曲线完成定量检测。
基本参数:

产品名称:人抗天然脱氧核糖核酸抗体(n-DNA-Ab)ELISA试剂盒
英文名称:n-DNA-Ab Elisa Kit
货号:Y-E479
规格:48T/96T
灵敏度:0.45IU/mL
检测范围:0.9IU/mL - 28.8IU/mL
反应时间:37℃温育 78min,二抗 43min,显色 17min
保存条件:2~8℃避光,DNA 包被板避免反复温差环境,防止抗原脱落
显色系统:TMB 单液显色
检测波长:450nm
标准曲线绘制:7 点标品线性拟合,结果用于红斑狼疮活动性评估
注意事项:狼疮活动期数值显著升高,药物缓解后抗体滴度下降,适合动态复查
试剂盒组成:

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原,结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线,定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物,提供酶结合位点
辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素 1瓶 与生物素结合,催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物,产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应,稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板,去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下:

试剂盒室温静置 35min,取出预装包被微孔板,标记各组实验孔位,拆分多余板条密封低温保存。
稀释待测样本加入样本孔 66μL,阴阳性对照孔添加对应对照液 66μL,空白孔不加液。
直接向所有加样孔加入酶标记抗原工作液 66μL,覆膜封口,轻微摇晃酶标板使体系混匀。
37℃恒温避光孵育 63min,防止光照导致酶活性下降。
揭去封板膜,倾倒孔内废液,洗涤液注满每孔浸泡 34s 弃去,循环洗板 6 次,彻底拍干微孔残留洗液。
每孔加入显色混合液 100μL,37℃避光显色 12min。
加入终止液 50μL 终止酶促反应,混匀后 15min 内 450nm 读取 OD 值,对照标准曲线计算抗体含量。
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