本试剂盒依托间接ELISA核心原理,微孔板预包被纯化的人突触前膜特异性抗原,待测样本中的抗突触前膜抗体可与固相抗原特异性免疫结合,孵育完成后洗除非特异性结合物质;加入酶标记抗人二抗与结合的PsmAb抗体精准结合,构建完整免疫反应体系;底物酶促显色后,显色深浅随样本中PsmAb含量升高而增强,终止显色后检测吸光度,结合标准曲线可定量检测样本中抗突触前膜抗体水平。
基本参数:

产品名称:人抗突触前膜抗体(PsmAb)ELISA试剂盒
英文名称:PsmAb Elisa Kit
货号:Y-E393
规格:48T/96T
灵敏度:0.65RU/mL
检测范围:1.3RU/mL - 41.6RU/mL
反应时间:37℃孵育 88min,酶结合物 48min,显色 20min
保存条件:2~8℃密封保存,微孔板不可沾水受潮
显色系统:即用型 TMB 显色液
检测波长:450nm
标准曲线绘制:仅做半定量参照曲线,主要用于重症肌无力分型辅助检测
注意事项:需搭配乙酰胆碱受体抗体联合检测,单一指标不能分型确诊
实验前准备工作:

1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分(酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液)从 2~8℃取出,室温(20~25℃)放置平衡 30min,严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制:按标签标注比例用去离子纯水稀释(常见 20× 浓缩液:1 份浓缩液 + 19 份纯水),混匀备用,现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释:
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解,室温静置 10min,轻柔吹打混匀;
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品,单独标记,剩余原液分装 - 20℃避光保存,避免反复冻融。
待测样本预处理:血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释,浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清;溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备:恒温 37℃孵育箱、酶标仪(450nm 主波长,630nm 参比)、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机(或手动洗板槽)、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染,移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条,剩余未使用板条装入铝箔密封袋,加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记:空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔(所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差)。
实验步骤如下:

试剂盒室温放置 27min,取出微孔反应板固定板条,编号区分空白、对照、待测样本三类孔位。
稀释处理后待测样本单孔加样 86μL,阴性对照与阳性对照孔加入对应对照液 86μL,空白孔不添加液体。
直接向所有加样孔加入酶结合工作液 86μL,封板封口,轻摇酶标板 30s 充分混匀孔内反应液。
37℃水浴孵育 47min,水浴液面必须没过微孔下半部分保证受热均匀。
揭膜弃净孔内液体,洗涤液灌满每孔浸泡 31s 倒掉,连续洗板 5 次,吸水纸充分拍干微孔残留洗液。
每孔依次添加显色 A 液、B 液各 50μL,避光混匀,37℃避光显色 14min。
加入终止液 50μL 终止酶促显色反应,摇匀后酶标仪 450nm 测定吸光度,对照标准曲线换算 PsmAb 抗体数值。
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