本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，96孔微孔板固定人MAP激酶(MAPK)特异性抗体，加入待测样本与标准品，样本中的MAPK抗原与固相抗体特异性免疫结合，洗涤去除游离杂质后加入酶标记二抗，构建免疫夹心复合物，酶促显色终止后检测吸光度，吸光度值与样本中MAPK含量呈线性正相关，可精准定量检测。
基本参数：
产品名称：人丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)ELISA试剂盒
英文名称：MAPK Elisa Kit
货号：Y-E3049
规格：48T/96T
灵敏度：最小检出 1.8pg/mL
检测范围：11pg/mL ~ 680pg/mL
反应时间：样本孵育 73min，酶标记二抗 48min，避光显色 18min，总用时 2h19min
保存条件：未拆封 2～8℃，分装浓缩试剂可 - 20℃冻存，开封板条 1 周内使用完毕
显色系统：双组份配比显色体系，1M 硫酸终止
检测波长：单 450nm 波长读取吸光度
标准曲线绘制：五参数 Logistic 拟合，8 个梯度标准品构建曲线
注意事项：应激、氧化损伤样本 MAPK 激活量上升；避免枪头划伤包被板固相层
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂盒室温复温 33min，稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 MAPK 标准品，取出所需板条。
标准孔加入 50μL 梯度 MAPK 标准液；样本孔加 48μL 稀释液 + 12μL 样本；空白孔无加样。
检测孔加入酶标记抗 MAPK 抗体 100μL，封板 37℃孵育 65min。
弃去孔内液体，洗涤液浸泡每孔 36s 甩干，重复洗板 5 次，板条充分拍干。
显色 A、B 液各 50μL 混匀加入，37℃避光显色 17min。
加入终止液 50μL 混匀终止反应。
酶标仪 450nm 测吸光度，绘制标准曲线定量 MAPK 含量。
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