本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中人CYP21B含量，微孔板预先包被纯化的抗人CYP21B特异性抗体，加入标准品与待测样本后，样本中的CYP21B抗原与固相抗体特异性结合，经洗涤去除残留杂质，加入辣根过氧化物酶标记的CYP21B二抗，形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心复合物，充分反应后洗涤去除游离酶标抗体，加入TMB底物显色，酸性溶液终止反应后测定OD值，根据标准曲线回归方程计算出待测样本中CYP21B的精准含量。
基本参数：
产品名称：人细胞色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISA试剂盒
英文名称：CYP21B Elisa Kit
货号：Y-E949
规格：48T/96T
灵敏度：检出极限 0.18ng/mL
检测范围：0.4-25.6ng/mL
反应时间：室温孵育样本 80min，二抗 65min，避光显色 18min
保存条件：未拆封 2-8℃；拆封剩余板条密封加干燥剂 2-8℃，不可冷冻冻裂包被板
显色系统：A 液缓冲体系 + B 液底物组分混合后显色
检测波长：450nm 为主，600nm 做参考校正背景
标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线，剔除偏离过大标准孔后计算最终浓度
注意事项：CYP21B 与 CYP21A 同源性高，样本不可交叉混用两套试剂盒，防止非特异性结合
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂盒置于室温环境 30min 回温，配置一步法抗体 - 酶复合物工作液，划分实验孔类型。
每孔先加注酶复合液 55μL，标品孔加梯度 CYP21B 标准液 45μL，样品孔加待测样本 45μL，空白孔加稀释缓冲液 45μL。
封板膜密封微孔板，37℃孵育 65min，倾倒废液，洗板 5 次，每次洗涤浸泡 30s，拍干残余洗液。
每孔加入单一 TMB 显色液 100μL，水平摇晃微孔板混匀。
遮光条件下 37℃显色 16min，依据标品颜色深浅判断显色程度。
每孔加入终止液 50μL，终止底物催化反应。
酶标仪 450nm 测 OD，绘制标准曲线计算样本 CYP21B 浓度。
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