基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术,该试剂盒包含了定量环磷酸腺苷(cAMP)所需的所有试剂,确保为你提供满足需求的完整工具。
Revvity 的 HTRF cAMP 试剂盒最适合测量响应 Gs 蛋白激活的 cAMP 调节,利用了稳定性和灵敏度的优化组合。
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分析原理:cAMP 试剂盒基于一种竞争形式,涉及用穴状化合物(供体)标记的特异性抗体和与 d2 偶联的 cAMP(受体)。这使得能够直接表征作用于贴壁细胞或悬浮细胞中 Gs 蛋白偶联受体的所有类型化合物。细胞产生的天然 cAMP 与 d2 标记的 cAMP 竞争结合单克隆抗 cAMP Eu³⁺穴状化合物。
分析方案:该方案简单直接,仅需两个孵育步骤:
通过目标化合物刺激细胞。
使用 HTRF 试剂检测 cAMP。
分析细节:cAMP Gs 动态产品规格:使用这个优化的试剂盒来研究最具挑战性和珍贵的细胞模型。该试剂盒设计为以最少的细胞消耗产生结果,具有最低的纳摩尔级 IC50。左移的 IC50 使你能够定量更低的 cAMP 浓度,显著减少所需的细胞数量。
分析验证:
激动剂剂量反应验证:表达内源性 β2 肾上腺素能受体的 HEK293 细胞用异丙肾上腺素激动剂处理 45 分钟。异丙肾上腺素特征明确,显示出与文献良好相关的正确效力。
拮抗剂剂量反应验证:以 7500 个细胞 / 孔的密度(位于试剂盒动态范围内的最佳细胞浓度)的 HEK293 细胞用一系列浓度的异丙肾上腺素(β2 肾上腺素能受体完全激动剂)处理。确定 EC80 - EC90 以选择用于拮抗剂模式实验的最佳激动剂浓度。拟合拮抗剂的系列稀释可以计算化合物的 IC50(效力),这与文献完全相关。
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