大鼠肺血管平滑肌细胞

大鼠肺血管平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的肺血管平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：大鼠肺血管平滑肌细胞

英文名称： Rat Pulmonary Vascular Smooth Muscle Cells

组织来源： 肺组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肺血管平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肺血管平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肺血管平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：DMEM/F12、15% FBS、双抗、Ⅱ 型胶原酶、胰酶、无菌 PBS。

2. 器械：显微解剖镊、剪子、筛网、离心管，4 周龄 SD 大鼠。

3. 实验台面紫外灭菌，所有液体提前预热。

二、取材与预处理

1. 大鼠麻醉处死，消毒胸腔取肺，精细剥离各级肺血管，剥离干净肺实质。

2. 血管段 PBS 冲净内部血液，剪碎成组织碎末，预冷 PBS 多次漂洗。

三、细胞分离与消化

1. 胶原酶消化液 37℃消化 45~60min，期间间断吹打组织。

2. 培养基终止消化，过滤后离心收集细胞沉淀。

3. PBS 重悬洗涤一次，去除多余酶与组织碎屑。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液接种培养瓶，差速贴壁 40min 去除内皮细胞，更换培养基继续培养。

2. 每 48h 换液一次，观察梭形平滑肌细胞克隆生长。

3. 传代后 α-SMA 染色鉴定，P1-P4 代用于后续诱导、给药实验。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。