产品名称 | 大鼠肾成纤维细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Rat Renal Fibroblasts | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2938 |
方法简介 实验室分离的大鼠肾成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠肾成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠肾成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠肾成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)elisa试剂盒 | VERO 非洲绿猴肾细胞 |
大鼠血管内皮生长因子D(VEGF-D)elisa试剂盒 | 人脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞 |
大鼠血管内皮生长因子B(VEGF-B)elisa试剂盒 | 人毛囊角质细胞 |
大鼠血管内皮细胞生长因子165a(VEGF165a)elisa试剂盒 | SW626 (人卵巢癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠Ⅱ型胶原a1(ColⅡa1)elisa试剂盒 | 小鼠肝癌细胞带荧光素酶Hepa 1-6+LUC(种属鉴定) |
大鼠Ⅱ型胶原代谢产物(C2C)elisa试剂盒 | 兔DC细胞 |
猪胰淀粉酶α2（PAMYα2）elisa试剂盒 | 小鼠原代海绵体平滑肌细胞 |
SW1990人胰腺癌细胞专用培养基 | FMOD基因过表达细胞株 |
SJSA-1人骨肉瘤细胞专用培养基 | D2HGDH基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜基质细胞专用培养基 | CCDC177基因过表达细胞株 |
大鼠原代嗅球神经干细胞专用培养基 | FOXF2基因过表达细胞株 |
人原代脐血DC细胞专用培养基 | FER基因过表达细胞株 |
大鼠肾成纤维细胞SNU-81细胞专用培养基 | BCO1基因过表达细胞株 |
大鼠原代骨骼肌细胞专用培养基 | EBF3基因过表达细胞株 |
实验准备：准备肾成纤维细胞专用培养基、无菌解剖器械、预冷HBSS，选取大鼠肾皮质间质组织。
无菌取材：无菌摘取大鼠肾脏，剔除肾包膜、血管及髓质组织，保留肾皮质间质组织，缓冲液漂洗去污。
组织处理：剪碎肾皮质间质组织，剔除肾小管、肾小球上皮组织，保留纯间质组织块。
酶解消化：胶原酶I联合胰酶37℃消化30min，轻柔震荡解离肾成纤维细胞。
纯化离心：血清终止消化，过滤除渣，1200rpm离心5min，收集成纤维细胞沉淀。
接种培养：完全培养基重悬接种，恒温CO₂培养箱静置贴壁培养。
常规养护：24h换液清除悬浮杂质，每2天换液一次，细胞增殖稳定，适合肾纤维化相关实验。
关键字： 大鼠肾成纤维细胞;肾组织;
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