大鼠视乳头星形胶质细胞

大鼠视乳头星形胶质细胞

采用差速贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的视乳头星形胶质细胞来源脑组织分离胶质细胞，经胶原酶 IV 消化和 Percoll 梯度离心后，接种于多聚赖氨酸包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、20 ng/mL FGF-2 及 10 ng/mL PDGF-AA）培养；通过免疫荧光染色检测胶质细胞特异性标志物 GFAP（星形胶质细胞）、O4/O4a（少突胶质细胞）、Iba1（小胶质细胞）或 S100β 表达，结合细胞形态学观察（星形突起、多突起 morphology）

产品名称：大鼠视乳头星形胶质细胞

英文名称： Rat Optic Papilla Astrocytes

组织来源： 视乳头组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠视乳头星形胶质细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法、结合差速贴壁制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠视乳头星形胶质细胞经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠视乳头星形胶质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠视乳头星形胶质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：多聚赖氨酸包被培养板，预热神经胶质专用培养基、预冷HBSS、胰酶，备好显微解剖器械、无菌筛网，低温无菌操作。

无菌取材：无菌剥离大鼠眼球，显微操作精准分离视乳头组织，剔除视网膜、血管及结缔组织，预冷HBSS漂洗。

组织处理：冰上剪碎视乳头组织为细小匀浆，轻柔吹打松散，去除残留神经纤维与杂质。

酶解消化：胰酶37℃温和消化12min，间断轻晃，促进星形胶质细胞解离，避免神经细胞污染。

终止过滤：胶质完全培养基终止消化，轻柔吹打后过滤，去除组织残渣。

离心重悬：1000rpm离心5min，弃上清，专用培养基轻柔重悬细胞，保护胶质细胞活性。

接种培养：低密度接种，静置培养48h不移动，3d后半量换液，后续规律换液纯化星形胶质细胞。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。