大鼠小肠黏膜上皮细胞

大鼠小肠黏膜上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对Sprague-Dawley大鼠的小肠黏膜上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征

产品名称：大鼠小肠黏膜上皮细胞

英文名称： Rat Small Intestinal Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 小肠组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠小肠黏膜上皮细胞采用中性蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠小肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠小肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠小肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：明胶包被培养板，预热肠上皮专用培养基、预冷无菌PBS、胰酶，无菌器械灭菌备用。

无菌取材：无菌摘取大鼠小肠，彻底冲洗肠腔粪便与杂质，剔除肠系膜及外层结缔组织。

组织处理：轻柔刮取小肠内壁黏膜上皮组织，剪碎为细小碎片，PBS多次漂洗去污。

酶解消化：胰酶37℃消化10min，温和间断吹打，促使上皮细胞充分解离。

终止过滤：血清培养基终止消化，过滤去除黏膜碎片与杂质团块。

离心重悬：1100rpm离心5min，弃上清，肠上皮专用培养基重悬细胞。

接种培养：定量接种，24h首次换液，后续隔天换液，维持上皮细胞纯度。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞体外可传10-15代，建议采用低代次细胞进行实验，高代次细胞可能出现表型漂移和凝集素摄取能力下降。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。