Q1:土壤 / 粪便样本中腐殖酸等抑制物如何去除?
A1:本试剂盒采用优化的磁珠法和特殊缓冲体系,能够高效去除腐殖酸、多糖、胆红素等 PCR 抑制物。获得的 RNA 纯度高,不含有蛋白、核酸酶和其他杂质,可直接用于 RT-PCR、qPCR 等下游分子生物学实验。
Q2:提取的土壤 RNA 产量很低,可能是什么原因?如何改进?
A2:可能原因及解决方案:
起始样本量不足:对于绝大多数类型的土壤,建议样品起始量为 0.5 g。含水量较高的底泥样品,由于实际土壤含量较低,可适当增加起始量。
裂解不充分:增加物理研磨的时间或次数,确保样本完全破碎。
RNA 降解:采集土壤样品后应尽快液氮冷冻并储存于 -70℃,或使用专用的土壤 RNA 保护溶液。
Q3:粪便 RNA 提取应如何保存样本以保证 RNA 完整性?
A3:建议采集后尽快处理。可分装后 -80℃ 冷冻,避免大块样本反复冻融。从冰箱中取出的样本,在完全溶解前即可加入裂解缓冲液开始研磨。新鲜采集未经冷冻的样品,应立即加入裂解缓冲液进行研磨,以获得最高质量的 RNA。
Q4:提取的 RNA 纯度差(A260/A280 偏低),如何解决?
A4:可能原因及解决方案:
蛋白质污染:增加结合缓冲液再一次洗涤。
盐类污染:增加洗涤缓冲液洗涤次数。如存在盐类污染,可加入 2.5 倍体积的乙醇和 0.1 M NaCl(终浓度)沉降 RNA,-20℃ 孵育 30 min 后离心重悬。
样本过量:减少起始样本量。
Q5:能否用于自动化提取?
A5:可以。本试剂盒采用磁珠法设计,核酸高效结合于磁珠上,支持 96 孔板自动化提取平台操作,无需酚/氯仿抽提步骤,适合高通量 RNA 提取需求。
Q6:提取的 RNA 可以用于哪些下游实验?
A6:提取的 RNA 纯度高、质量稳定,适用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、RNA-seq 等常规分子生物学实验。