兔胰腺导管上皮细胞

兔胰腺导管上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对新西兰大白兔的胰腺导管上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平⁠⁠

产品名称：兔胰腺导管上皮细胞

英文名称： Rabbit Pancreatic Ductal Epithelial Cells

组织来源： 胰腺组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔胰腺导管上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合密度梯度离心法、差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔胰腺导管上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔胰腺导管上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔胰腺导管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

1. 细胞复苏：取出冻存兔胰腺导管上皮细胞冻存管，37℃水浴快速融化，少量冰晶残留即可取出，酒精擦拭管壁消毒，移入安全柜，缓慢将细胞悬液加入含有胰腺导管上皮完全培养基的离心管。

2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束，小心吸取丢弃上清液，胰腺来源上皮细胞沉淀松散，避免吸走细胞。

3. 轻柔重悬细胞沉淀：加入预热兔胰腺导管上皮细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀，打散团聚细胞，制备单细胞悬液，降低吹打力度减少细胞损伤。

4. 细胞计数接种培养瓶：活细胞计数之后，按照推荐接种密度接种培养瓶，接种完毕十字轻晃培养瓶，使细胞均匀铺展瓶底，避免局部堆积。

5. 培养箱静置孵育贴壁：将培养瓶放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置 24h，期间不要挪动培养瓶，给导管上皮细胞充足贴壁时间。

6. 首次换液清除死细胞碎片：24h 后取出显微镜观察贴壁，弃去旧培养基，清除悬浮死亡细胞，补入预热新鲜完全培养基，放回培养箱。

7. 后续培养传代实验：每 2‑3 天更换新鲜培养基，观察导管上皮细胞形态，细胞汇合 80%‑85% 进行消化传代，可用于胰腺体外相关研究实验。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。