产品名称 | 兔真皮微血管内皮细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Rabbit Dermal Microvascular Endothelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3744 |
方法简介 实验室分离的兔真皮微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔真皮微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔真皮微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔真皮微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取目标组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、相应专用培养基组分
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷PBS冲洗去除血液和杂质
剪碎组织后采用胶原酶消化法(37度、1-2小时)分散细胞
过滤后300g离心8-10分钟收集细胞
根据细胞类型采用适当方法进一步纯化(密度梯度离心/免疫磁珠分选/差速贴壁)
原代培养要点
将纯化后的细胞接种于适当包被的培养皿中
使用含10%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，根据细胞生长特性调整培养条件
常见问题优化
细胞得率低：根据组织特性优化消化时间和酶浓度
细胞纯度不高：采用多种纯化方法联合使用提高纯度
细胞表型维持：控制传代次数，必要时采用特殊培养基或包被基质
大鼠可溶性白介素1受体2(sIL-1R2)elisa试剂盒 | A-427非小细胞肺癌 |
大鼠分泌型免疫球蛋白G(sIgG)elisa试剂盒 | 小鼠羊膜间充质干细胞 |
大鼠特异性IgE抗体(SIgE)elisa试剂盒 | 小鼠脉络膜微血管内皮细胞 |
大鼠可溶性细胞间粘附分子(sICAM)elisa试剂盒 | 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞 |
大鼠α肾上腺素能受体(αAR)elisa试剂盒 | 人非小细胞肺癌细胞NCI-H2228(STR鉴定正确) |
大鼠α酮戊二酸(αKA)elisa试剂盒 | 犬乳腺上皮细胞 |
猪硫酸肝素糖蛋白（HSPG）elisa试剂盒 | 人原代气管上皮细胞 |
snu-1人胃癌细胞专用培养基 | LDB3基因过表达细胞株 |
RWPE-2人前列腺正常细胞专用培养基 | FAM169A基因过表达细胞株 |
大鼠原代角膜基质细胞专用培养基 | GAS2L3基因过表达细胞株 |
兔原代乳腺成纤维细胞专用培养基 | AIFM2基因过表达细胞株 |
人原代肾成纤维细胞专用培养基 | DLL1基因过表达细胞株 |
兔真皮微血管内皮细胞SK-OV-3+luc细胞专用培养基 | ATL1基因过表达细胞株 |
小鼠原代肺间充质干细胞专用培养基 | SLC26A1基因过表达细胞株 |
1. 细胞复苏：取出冻存兔真皮微血管内皮细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存样本，少量冰晶残留取出，酒精消毒管壁，安全柜中将细胞悬液缓慢加入内皮细胞专用完全培养基的离心管。
2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束，小心吸除上清冻存液，内皮细胞沉淀松散，吸上清时避免触碰管底。
3. 温和重悬细胞沉淀：加入预热兔真皮微血管内皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，制备单细胞悬液，内皮细胞对机械剪切耐受弱，吹打力度轻柔。
4. 计数接种培养瓶：活细胞计数，按照微血管内皮细胞适宜接种密度接种，接种完成十字轻晃培养瓶，细胞均匀分布培养底面。
5. 培养箱静置孵育贴壁：培养瓶放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，减少移动，保障内皮细胞贴壁。
6. 初次换液去除悬浮碎片：24h 后显微镜镜检贴壁状态，弃旧培养基，清除悬浮死细胞碎片，添加预热新鲜完全培养基放回培养箱。
7. 维持培养传代实验：间隔 2‑3 天更换培养基，观察内皮细胞多边形形态，汇合度 80%‑85% 进行消化传代，用于血管生成相关体外模型。
关键字： 兔真皮微血管内皮细胞;皮肤组织;
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