兔支气管上皮细胞

兔支气管上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从新西兰大白兔靶组织中分离支气管上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：兔支气管上皮细胞

英文名称： Rabbit Bronchial Epithelial Cells

组织来源： 支气管组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔支气管上皮细胞采用链霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法结合机械刮刷并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔支气管上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔支气管上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔支气管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

1. 细胞复苏：取出冻存兔支气管上皮细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，少量冰晶残留取出冻存管，75% 酒精消毒管壁，移入生物安全柜，将细胞悬液缓慢滴加到含有支气管上皮完全培养基的离心管。

2. 离心去除冻存保护试剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心完成，轻柔吸弃上层冻存上清，上皮细胞沉淀松散，操作防止带走细胞。

3. 温和重悬细胞沉淀：加入预热兔支气管上皮细胞专用完全培养基，低力度吹打管底沉淀，打散细胞团块，制备单细胞悬液，降低机械损伤。

4. 计数接种铺瓶：活细胞计数，按照上皮细胞合适接种密度接种培养瓶，接种结束十字晃动培养瓶，细胞均匀铺于瓶底。

5. 培养箱静置孵育贴壁：将培养瓶置于 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，不移动培养瓶，保障上皮细胞贴壁。

6. 首次换液清除死细胞碎片：孵育 24h 后镜检贴壁情况，弃除旧培养基，去除悬浮死亡细胞，补入预热新鲜完全培养基放回培养箱。

7. 后续培养传代应用：每 2‑3 天更换新鲜培养基，观察多边形上皮细胞形态，细胞汇合 80‑85% 开展胰酶消化传代，用于呼吸道上皮损伤模型实验。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。