产品名称 | 兔脂肪间充质干细胞 | 组织来源 | 脂肪组织 |
英文名称 | Rabbit Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2796 |
方法简介 实验室分离的兔脂肪间充质干细胞采用胶原酶消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脂肪间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔脂肪间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脂肪间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠特异性IgE抗体(SIgE)elisa试剂盒 | COR-L23/CPR非小细胞肺癌 |
大鼠可溶性细胞间粘附分子(sICAM)elisa试剂盒 | 兔心室心肌细胞 |
大鼠小异二聚体伴侣(SHP；NR0B2)elisa试剂盒 | 小鼠巩膜成纤维细胞 |
大鼠可溶性血小板膜糖蛋白VI(sGPVI)elisa试剂盒 | 大鼠气管平滑肌细胞 |
大鼠α-突触核蛋白(α-Syn)elisa试剂盒 | 人肝癌细胞Hep3B(STR鉴定正确) |
大鼠α-微管蛋白(α-tubulin)elisa试剂盒 | 小鼠脑血管周细胞 |
猪流行性腹泻病毒IgG抗体（PEDV-IgG）elisa试剂盒 | 大鼠原代肾近端小管上皮细胞 |
SNU-398人胃癌细胞专用培养基 | EGR3基因过表达细胞株 |
SCaBER人膀胱鳞癌细胞专用培养基 | GRHL3基因过表达细胞株 |
人原代气管上皮细胞专用培养基 | FBXO33基因过表达细胞株 |
人原代扁桃体动脉平滑肌细胞专用培养基 | ZXDC基因过表达细胞株 |
人原代腮腺肿瘤细胞专用培养基 | OBI1基因过表达细胞株 |
兔脂肪间充质干细胞SNU-16细胞专用培养基 | EVI5L基因过表达细胞株 |
猪原代胰腺腺泡上皮细胞专用培养基 | CATSPER4基因过表达细胞株 |
1. 细胞复苏：取出冻存兔脂肪间充质干细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，少量冰晶留存即取出冻存管，酒精擦拭管壁，安全柜中将细胞悬液缓慢转移至装有间充质干细胞完全培养基的离心管。
2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心完成，小心吸弃上层冻存上清液，不要扰动管底间充质干细胞沉淀。
3. 重悬离散细胞沉淀：加入预热兔脂肪间充质干细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀，打散细胞团聚物，制备均一的单细胞悬液。
4. 计数接种培养瓶：活细胞计数，按照间充质干细胞标准接种密度接种，接种完毕十字轻晃培养瓶，使细胞均匀铺展瓶底。
5. 培养箱静置孵育贴壁：将培养瓶平稳放置 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，减少移动，保障干细胞贴壁伸展。
6. 初次换液清除碎片杂质：24h 后镜检细胞贴壁状态，弃除旧培养基，清除悬浮死细胞，补入预热新鲜完全培养基放回培养箱。
7. 扩增培养与功能实验：每 2‑3 天更换新鲜培养基，细胞汇合 80‑85% 进行胰酶消化传代，可开展多向分化、组织修复相关体外实验。
关键字： 兔脂肪间充质干细胞;脂肪组织;
上海莼试生物技术有限公司Shanghai C-reagent Biotechnology Co. Ltd. 专业服务于生命科学领域，拥有分子生物学、医学、药学、化学等方面的科研技术团队，经营科研生化试剂、分析试剂、实验耗材，推出技术先进、质量稳定的科研产品。为全国乃至于世界各地科研机构、工业、电子、医疗、科技等领域的客户，提供系统的产品资源及配套技术服务。推出十几个种类产品线，部分产品接受定制服务！
公司着力立足于生命科学领域，全力打造品质生物科技产品链和技术服务链！