兔直肠平滑肌细胞

兔直肠平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从新西兰大白兔直肠平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：兔直肠平滑肌细胞

英文名称： Rabbit Rectal Smooth Muscle Cells

组织来源： 直肠组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔直肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔直肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔直肠平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔直肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

1. 细胞复苏：取出冻存兔直肠平滑肌细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存样本，留有少量冰晶取出，酒精消毒管壁，移入生物安全柜，细胞悬液缓慢滴入平滑肌细胞完全培养基的离心管。

2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束，轻柔吸弃上层冻存上清液，避免触碰管底细胞沉淀。

3. 温和重悬细胞沉淀：加入预热兔直肠平滑肌细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀，打散细胞团块，制备单细胞悬液，减少机械剪切损伤。

4. 计数接种铺瓶：活细胞计数，按照平滑肌细胞推荐接种密度接种培养瓶，接种完成十字晃动培养瓶，细胞均匀分布瓶底。

5. 培养箱静置贴壁孵育：培养瓶放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，期间不要挪动培养瓶，保证平滑肌细胞贴壁。

6. 首次换液清除悬浮死细胞：孵育 24h 后显微镜镜检贴壁，弃旧培养基，去除悬浮死亡细胞碎片，添加预热新鲜完全培养基放回培养箱。

7. 常规培养传代使用：间隔 2‑3 天更换培养基，观察长梭形平滑肌细胞形态，汇合度 80‑85% 消化传代，用于肠道平滑肌相关体外研究。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.内皮细胞增殖较快，培养5-7天即可达到融合，传代时注意控制胰酶消化时间不宜过长。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.实验选用新西兰白兔或日本大耳兔，需注意兔源细胞的种属特异性差异。 换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。