小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞

小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从C57BL/6小鼠靶组织中分离Ⅱ型肺泡上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞

英文名称： Mouse Type II Alveolar Epithelial Cells

组织来源： 肺组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械、培养器皿高压灭菌；超净台紫外消杀，小鼠麻醉器械提前消毒。

2. 配制试剂：无菌 D-Hanks 液（加双抗）、0.1%Ⅰ 型胶原酶消化液、DMEM/F12 完全培养基、红细胞裂解液。

3. 小鼠腹腔麻醉耗材、气管插管针头提前备好冰上预冷试剂。

二、取材与预处理

1. 颈椎脱臼处死小鼠，胸腹腔 75% 酒精消毒，暴露气管与双肺，气管插管固定。

2. 经气管缓慢灌注预冷 D-Hanks 液灌洗肺泡 3 次，弃灌洗液清除肺泡内杂质，完整摘取肺组织置于冰上 PBS 漂洗。

3. 剔除肺门血管、支气管多余结缔组织，剪碎肺组织至 0.5~1mm³ 细小组织块。

三、细胞分离与消化

1. 组织块加入 Ⅰ 型胶原酶，37℃水浴消化 30min，每 10min 震荡一次。

2. 加入完全培养基终止消化，反复吹打制成单细胞悬液。

3. 悬液加入红细胞裂解液室温裂解 3min，离心弃上清去除红细胞。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液先后过 100 目、200 目滤网，采用差速贴壁法：先接种培养 1h 去除成纤维细胞杂细胞。

2. 收集未贴壁细胞悬液，调整细胞密度接种于培养板 / 培养瓶。

3. 37℃5% CO₂培养，48h 换液，每 2 天换液，细胞长满后按需传代鉴定。

1.取材时必须在冰上低温操作，30分钟内完成背根神经节或目标脑区的分离与解剖处理，室温暴露时间过长会直接导致神经元活性显著下降。

2.培养表面需用0.01mg/ml纤连蛋白和0.1mg/ml多聚赖氨酸双重包被，神经元贴壁率和轴突延伸长度均有显著提升。

3.该细胞属于终末分化细胞，体外完全不增殖，全程禁止传代操作，所有功能实验必须在分离后7天内完成，避免神经元自发凋亡。

4.培养基中需补充B27(1:50稀释)和20uM L-谷氨酰胺，可维持神经元长期存活并促进突触形成。

5.培养期间每2-3天半量换液一次，换液时用移液枪沿壁缓慢加入避免产生液流剪切力损伤神经元突起。