小鼠肺动脉成纤维细胞

小鼠肺动脉成纤维细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的肺动脉成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：小鼠肺动脉成纤维细胞

英文名称： Mouse Pulmonary Artery Fibroblasts

组织来源： 肺动脉组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肺动脉成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肺动脉成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肺动脉成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存复苏：液氮取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，留有少量冰晶取出，酒精消毒管壁带入超净台。

悬液转移：无菌开启冻存管，细胞悬液转移至装有肺动脉成纤维细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔混匀。

离心洗涤：1000r/min 离心 5min，离心完毕，弃除上层冻存上清，留存底部细胞沉淀。

重悬沉淀：加入预热专用完全培养基，吹打沉淀充分打散细胞团，制备单细胞悬液。

接种铺板：细胞计数，按推荐密度接种，十字摇晃培养瓶，使细胞均匀铺底。

孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂培养箱静置 24h，不要挪动培养瓶。

换液观察：24h 更换新鲜培养基，2‑3 天换液一次，观察长梭形成纤维细胞，汇合 85‑90% 传代。

1.取材过程中需保持组织湿润和低温，血管组织离体后超过30分钟会导致内皮细胞活力明显下降。

2.使用纤维连接蛋白(10ug/ml)包被培养器皿可显著改善内皮细胞贴壁速度和铺展形态。

3.内皮细胞增殖较快，培养5-7天即可达到融合，传代时注意控制胰酶消化时间不宜过长。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。