小鼠冠状动脉平滑肌细胞

小鼠冠状动脉平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的冠状动脉平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：小鼠冠状动脉平滑肌细胞

英文名称： Mouse Coronary Artery Smooth Muscle Cells

组织来源： 冠状动脉

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠冠状动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠冠状动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠冠状动脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌准备：超净台紫外消毒 30min，平滑肌细胞完全培养基、PBS、胰酶消化液，37℃水浴预热；准备 T25 培养瓶、离心管，标记细胞信息。

冻存细胞复苏：冻存管 37℃水浴快速融化，酒精消毒管壁移入超净台，细胞悬液加入装有完全培养基的离心管轻柔混匀。

离心去除冻存保护剂：300g 室温离心 5min，吸弃上层冻存液上清。

重悬铺瓶：加入平滑肌完全培养基，轻柔吹打打散细胞团，细胞计数，按适宜密度接种 T25 培养瓶，多角度晃动培养瓶，细胞均匀铺底。

孵育贴壁培养：置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置培养，复苏初期 48h 避免挪动培养瓶。

换液维护细胞：48h 后首次换液，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗细胞层，去除悬浮碎片死细胞，补入新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察梭形平滑肌细胞。

消化传代处理：细胞汇合 75‑80%，弃培养基，PBS 清洗，胰酶消化，镜下细胞回缩，完全培养基终止消化；收集悬液离心计数，用于收缩表型、增殖迁移实验。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.实验用药处理建议设置溶剂对照组，DMSO终浓度不超过0.1%以避免溶剂毒性。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.换液时每2天更换一次新鲜培养基，换液时动作轻柔避免冲刷已贴壁的内皮细胞单层。