小鼠脑微血管内皮细胞

小鼠脑微血管内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从C57BL/6小鼠的脑微血管内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：小鼠脑微血管内皮细胞

英文名称： Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 脑组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠脑微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠脑微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠脑微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代；不建议多次传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠脑微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：脑微血管内皮细胞专用完全培养基、无菌 PBS、0.25% 胰酶‑EDTA 消化液 37℃水浴回温，超净台紫外灭菌 30min，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌移液耗材，检查冻存管无开裂漏液。

冻存管解冻：液氮取出冻存管，快速放入 37℃水浴，持续轻晃 1‑2min，大部分冰晶融化，残留少量冰屑即可取出，75% 酒精擦拭管壁，移入超净工作台。

稀释离心：打开冻存管，细胞悬液缓慢滴加到含有 4mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降细胞，去除 DMSO 冻存上清。

重悬铺瓶接种：离心结束弃上清，加入 2mL 脑微血管内皮细胞完全培养基，轻柔吹打重悬细胞沉淀，打散细胞团，悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基，多角度轻晃培养瓶实现细胞均匀铺板。

恒温孵育贴壁：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，不随意挪动培养瓶，保障微血管内皮细胞贴壁。

换液镜检：24h 后取出培养瓶，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗细胞层，清除悬浮死细胞碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日镜检细胞形态，排查污染。

传代操作：细胞汇合度 80%，弃培养基，PBS 清洗细胞 2 次，加入胰酶消化液 37℃消化 1‑3min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞，离心，按适宜比例分瓶传代。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。