小鼠脐静脉内皮细胞

小鼠脐静脉内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离C57BL/6小鼠脐静脉内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：小鼠脐静脉内皮细胞

英文名称： Mouse Umbilical Vein Endothelial Cells

组织来源： 脐带组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠脐静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠脐静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠脐静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠脐静脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：脐静脉内皮细胞专用完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液 37℃水浴回温，超净工作台紫外照射 30min 灭菌，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌枪头等耗材，检查冻存管编号，确认无破损漏液。

水浴快速解冻：取出液氮冻存管，浸入 37℃温水，轻柔摇晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，仅留少量冰屑即可取出，酒精擦拭管壁，移入超净台。

稀释离心去除冻存保护剂：无菌开启冻存管，细胞悬液缓慢滴入装有 4‑5mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降活细胞，弃去含 DMSO 的上层冻存上清。

重悬细胞接种：倒掉离心上清，加入 2mL 脐静脉内皮细胞完全培养基，反复轻柔吹打管底沉淀，打散细胞团聚物，细胞悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基，水平晃动培养瓶，细胞均匀铺于瓶底。

培养箱静置孵育：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置培养 24h，减少挪动，利于内皮细胞贴壁。

换液观察状态：24h 后取出培养瓶，吸除旧培养基，PBS 轻柔冲洗细胞层，去除悬浮死细胞、细胞碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日显微镜观察细胞形态，检查细菌真菌污染。

传代扩增：细胞汇合度 80%，弃培养基，PBS 洗涤细胞 2 次，加入胰酶消化液，37℃消化 1‑3min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集全部细胞悬液，离心，按合适比例分瓶传代。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。