小鼠小肠Cajal间质细胞

小鼠小肠Cajal间质细胞

运用胶原酶消化-差速贴壁联合策略从C57BL/6小鼠小肠Cajal间质细胞组织中分离纯化目标细胞，经 Percoll 密度梯度离心去除杂细胞后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用含多种添加剂的专用培养基维持培养；通过流式细胞术分析表面标志物表达谱，免疫荧光染色验证特异性蛋白表达，并结合功能实验（如分泌功能检测、信号通路分析）综合鉴定细胞类型。

产品名称：小鼠小肠Cajal间质细胞

英文名称： Interstitial Cells of Cajal from Mouse Small Intestine

组织来源： 小肠组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠小肠Cajal间质细胞采用胶原酶消化法结合组织贴块法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠小肠Cajal间质细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠小肠Cajal间质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 不建议传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠小肠Cajal间质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

小肠组织取材消毒：小鼠安乐死后酒精消毒腹部，开腹快速取出近端小肠肠段，置于预冷无菌 PBS，剔除小肠外部肠系膜、脂肪组织，保持肠管完整，全程低温，减少平滑肌细胞应激损伤。

肠管清洗与黏膜剥离：沿肠管纵向剪开肠壁，PBS 反复冲洗肠腔内容物，刮除肠腔内侧小肠黏膜层，保留肌层组织，多次漂洗肌层组织，清除黏膜残留、食糜碎屑。

肌层组织剪碎消化：将小肠肌层剪为 1 mm 左右碎块，转移至含胶原酶、蛋白酶抑制剂的专用消化液，37℃水浴消化 30‑40 min，间歇颠倒混匀，观察组织松散，控制消化时长，防止 Cajal 间质细胞破损。

终止消化机械吹打：加入含血清完全培养基终止消化，反复轻柔吹打组织悬液，释放间质细胞，100 μm 细胞筛粗滤去除大块未消化组织，收集细胞悬液。

差速离心富集目标细胞：采用差速离心，先 500 r/min 短时间离心去除大组织碎片，吸取上清，1200 r/min 离心 7 min 收集细胞沉淀，培养基重悬沉淀，洗涤去除消化酶杂质。

接种铺板孵育贴壁：配制 Cajal 间质细胞专用完全培养基，调整细胞密度接种于培养瓶，37℃5% CO₂培养箱静置培养，该细胞贴壁速度慢，接种初始 48h 避免移动培养容器。

选择性换液纯化细胞：培养 24‑36h 首次换液，去除悬浮死细胞与平滑肌杂细胞；每 2‑3 天更换新鲜培养基，利用细胞贴壁差异逐步纯化 Cajal 间质细胞，严控培养时间，该原代细胞增殖能力有限。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.培养器皿无需特殊包被，普通培养板即可支持平滑肌细胞贴壁，但用纤连蛋白包被可增强细胞贴附。

3.该细胞体外传代能力较强，建议3-5代内使用，过高代次可能导致收缩表型标志物表达下降。

4.在DMEM培养基中补充10-20%FBS及1%青霉素-链霉素即可满足生长需求，必要时添加10ng/ml EGF。

5.培养期间每48小时换液，若发现细胞由梭形变为多角形可能提示表型转换，需调整实验时间窗。