产品名称 | 小鼠小肠黏膜上皮细胞 | 组织来源 | 小肠组织 |
英文名称 | Mouse Small Intestinal Mucosal Epithelial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2861 |
方法简介 实验室分离的小鼠小肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠小肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠小肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠小肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠磷酸化血管内皮生长因子受体1(p-VEGFR1)elisa试剂盒 | B16-F0黑素瘤 |
大鼠五聚素3(PTX3)elisa试剂盒 | 兔脑动脉平滑肌细胞 |
大鼠磷酸化酪氨酸激酶(p-TrkA)elisa试剂盒 | 兔肌腱细胞 |
大鼠蛋白酪氨酸磷酸酶受体S(PTPRS)elisa试剂盒 | 人直肠平滑肌细胞 |
大鼠苯乙酰谷氨酰胺(PAG)elisa试剂盒 | 人成骨肉瘤细胞MG-63(STR鉴定正确) |
大鼠吡啶交联物(PY)elisa试剂盒 | 小鼠肾动脉平滑肌细胞 |
猪胍基乙酸N-甲基转移酶（GAMT）elisa试剂盒 | 大鼠CD3+T淋巴细胞（阳选） |
NOZ人胆囊癌细胞专用培养基 | GDF5基因过表达细胞株 |
P815小鼠肥大瘤细胞专用培养基 | CNBD2基因过表达细胞株 |
人原代甲状腺上皮细胞专用培养基 | PPARGC1A基因过表达细胞株 |
CTX细胞专用培养基 | F11基因过表达细胞株 |
人原代NaiveTcell细胞专用培养基 | DENND6A基因过表达细胞株 |
小鼠小肠黏膜上皮细胞大鼠原代睾丸支持细胞专用培养基 | AVIL基因过表达细胞株 |
DAUDI 细胞专用培养基 | FBXW8基因过表达细胞株 |
小肠组织取材处理：小鼠处死后腹部消毒，无菌摘取小肠，放入预冷 PBS 溶液，剥离肠系膜与表面脂肪，纵向剪开肠管，充分冲洗肠腔内粪便、食糜残渣。
肠组织解离预处理：将小肠剪成 2‑3 cm 肠段，放入含有 EDTA 解离缓冲液的离心管中，4℃低温摇床震荡孵育 20‑30 min，松动黏膜层上皮细胞与固有层之间连接。
震荡洗脱上皮隐窝团：取出肠段，更换新鲜 PBS，剧烈震荡离心管，洗脱小肠黏膜上皮以及隐窝细胞，弃去肠管组织，收集含有上皮细胞团的悬液。
过滤分离细胞团块：依次采用 100 μm、40 μm 细胞筛分级过滤，去除固有层结缔组织碎片，富集小肠上皮隐窝细胞团，收集过滤后的细胞悬液。
离心洗涤纯化沉淀：900 r/min 离心 6‑7 min，弃上清，小肠上皮细胞专用完全培养基轻柔重悬沉淀，再次离心洗涤，去除 EDTA 缓冲液残留以及红细胞。
基质胶包被板接种：将细胞悬液调整适宜密度，接种于提前铺好基质胶的培养板，置于 37℃、5% CO₂培养箱静置培养，上皮细胞团需要基质支撑利于存活贴壁。
定期换液观察增殖：接种 24h 后半量更换小肠上皮完全培养基，清除漂浮死细胞；后续每 2 天换液，观察上皮集落形成，避免杂细胞过度生长，原代小肠上皮细胞传代次数有限。
关键字： 小鼠小肠黏膜上皮细胞;小肠组织;
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