小鼠胸腺淋巴细胞

小鼠胸腺淋巴细胞

从C57BL/6小鼠胸腺淋巴细胞组织标本经机械研磨与胶原酶消化获取单细胞悬液，通过 Ficoll-Paque 密度梯度离心分离淋巴细胞层，经红细胞裂解液处理后再悬浮于含 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基中，添加特异性细胞因子（如 IL-2 维持 T 细胞活性、IL-4 诱导 M2 极化）进行体外培养；通过免疫荧光染色检测 CD68、CD163（巨噬细胞极化标志）、CD3/CD4/CD8（T细胞标志）表达，并经功能实验（细胞毒性 assay、cytokine release assay）验证

产品名称：小鼠胸腺淋巴细胞

英文名称： Mouse Thymic Lymphocytes

组织来源： 胸腺组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠胸腺淋巴细胞采用机械研磨法结合密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠胸腺淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠胸腺淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠胸腺淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

胸腺组织取材分离：小鼠安乐死后 75% 酒精消毒颈部胸腔，无菌解剖打开胸腔，精准取出胸腺组织，放入预冷无菌 RPMI‑1640 基础培养基，剔除胸腺外部附着脂肪、结缔组织。

组织漂洗研磨处理：RPMI‑1640 培养基漂洗胸腺组织 2 次去除血液；将胸腺放置无菌研磨筛网上，无菌研磨棒轻柔研磨，将胸腺组织充分碾碎，释放内部淋巴细胞。

细胞悬液收集过滤：研磨过程持续滴加基础培养基，细胞透过筛网流入下方离心管，使用 70 μm 无菌细胞筛二次过滤悬液，去除结缔组织团块，得到淋巴细胞悬液。

裂解去除红细胞：向细胞悬液加入预冷红细胞裂解液，室温避光孵育 3‑5 min，看到液体透亮，立刻加入 RPMI‑1640 培养基终止裂解反应。

离心洗涤淋巴细胞沉淀：1000 r/min 离心 6‑7 min，弃上清，淋巴细胞完全培养基重悬细胞沉淀，再次离心洗涤一遍，清除裂解液残留。

细胞悬液接种培养：用胸腺淋巴细胞完全培养基调整细胞浓度，接种细胞培养板，放置 37℃、5% CO₂培养箱悬浮培养，淋巴细胞属于悬浮细胞，不会贴壁。

刺激扩增与换液维护：根据实验需求加入淋巴细胞活化刺激因子；48h 半量换液，去除细胞碎片；原代胸腺淋巴细胞体外存活时间有限，及时开展下游实验，不可长期传代。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。